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IMUNOENSAIOS - Coggle Diagram
IMUNOENSAIOS
Técnicas com reagentes marcados
Imunofluorescência: Utiliza o fluorocromo; usa sondas (Ac específicos e conjugado com marcado fluorescente; detecta Ac/Ag; fonte de luz UV; subjetividade de leitura; maior sensibilidade e maior especificidade
Indireta
Pesquisa de Ag e Ac; utiliza dupla camada; Ag + Ac específico não fluorescente + Ac marcado com fluorocromo (Ac marcado é específico contra Ag do 1° Ac - Anti Ig
Pesquisa Ag
Ag incubado com Ac específico > Lavagem > Incubação com uma anti-Ig marcada com fluorocromo > Se houver Ag forma o conjugado > fluorescência
Pesquisa Ac
Fixa o Ag conhecido > Incuba o soro (Ac) do paciente com Ag > Lavagem > Incuba com anti-Ig marcado com fluorocromo > Se houver Ac no soro o conjugado é formado > fluorescência
diagnóstico sorológico; chagas; SIDA/AIDS;hepatite; FAN
Direta
Pesquisa Ag; utiliza marcadores (Ac com fluorocromo) que vão se ligar diretamente ao Ag; depois dessa ligação lava a mostra e só ficam os marcados, recebendo luz para identificação
microorganismos; secreções; células tumorais; dermatite; LES
Citometria de fluxo: Identifica e enumera células contendo Ag particular; tamanho; granulosidade; emissão de fluorescência; milhares de células vivas por minuto
Ligação Ac/Ag com conjugado > essa amostra entra na máquina de citometria de fluxo > passa no feixe de luz uma a uma (padrão de desvio) > imunofenotipagem
imunofenotipagem (diferencia leucemia de linfoma); detecta TCD4 em pacientes com HIV
Elisa: Ensaio de imunoabsorção enzimática; imobilização de um dos complementos na fase sólida (2° elemento conjugado com enzima; detecção de cor ou densidade óptica; alta sensibilidade; alta especificidade
Elisa direto
Pesquisa Ag > coloca Ac marcado com enzima + substrato
Elisa sanduíche
É direto; Pesquisa Ag (2 anticorpos > captura > Detecção
Elisa indireto
Pesquisa Ac (usando um anti- Ac ou Ac secundário
Elisa competitivo
Pesquisa de Ag (+ comum) e Ac; prevalece o que tiver maior quantidade; 2 Ag - o da pesquisa e o competitivo - tentam se ligar ao Ac
Western Blot: Imunodetecção de proteínas (Ag/Ac) após separação em eletroforese; caracteriza e quantifica multíplas proteínas (amostras complexas); maior sensibilidade e maior especificidade
1°- Extração e quantificação de proteínas
2°- Fracionamento das proteínas em um gel (eletroforese)
3°- Transferência das proteínas para uma membrana favorável
4°- Encobre a membrana com Ac específico (marcado com fluoróforo/ enzima/ radioisótopo); se tiverem Ac para essa proteína vão se ligar
5°- Revelação da membrana:
. Se utilizar o fluoróforo, usa o UV e vai fluorescer
. Se utilizar uma enzima, coloca o substrato da mesma e há uma mudança de cor
diagnósticos de doenças; teste confirmatório para HIV; detecta proteínas defeituosas; teste definitivo para hepatite B e herpes