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Polymerase Chain Reaction - Coggle Diagram
Polymerase Chain Reaction
A Reação em cadeia da polimerase (PCR: Polymerase Chain Reaction ) é uma técnica utilizada na biologia molecular para amplificar uma única cópia ou algumas cópias de um segmento de DNA em várias ordens de grandeza, gerando milhares a milhões de cópias de uma determinada sequência de DNA.
três
fases
Anelamento
Anelamento de primers.
Temperatura de anelamento é dependente do
conteúdo de G+C.
40–68°C, 20 s
Extensão
Síntese da nova fita
70–75°C, 30 s
Denaturação
Denaturação do DNA alvo.
90–96°C, 20 s
PCR
Polimerase Termoestável
Taq pol
Pfu pol
Vent pol
Template
Usual DNA
Pode ser RNA se um passo extra for adicionado
Primers
Pode ser específico ou randômico.
Modificações da PCR
Nested PCR
Multiplex PCR
Tailed primers
Sequence-specific PCR
Reverse-transcriptase PCR
Long-range PCR
Whole-genome amplification
RAPD PCR (AP-PCR)
Quantitative real-time PCR
Limitações da PCR
Relativamente ainda Caro
Riscos de Contaminação
Complexidades no desenho de Primers e Anelamento-Primer
Cálculos no números de cópias (Quantitativo) e necessidade de genes de referências validados (Relativo).
Estabelecimento de Padrões rigorosos