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TÉCNICAS BIOQUÍMICAS (I)
1.3 Espectrofotometría de luminiscencia
1.3.1 Fotoluminiscencia
Todo fenómeno de emisión de luz que no esta asociado a altas temperaturas.
Clasificacion
Quimioluminiscencia
La energía proviene de una reacción química
Bioluminiscencia
Tiene lugar en un ser vivo
Fotoluminiscencia
La excitación tiene lugar por absorción de fotones
Fluorescencia
Periodo corto de tiempo
Fosforescencia
Periodo desde pocos segundos hasta minutos o incluso horas
Electroquimioluminiscencia
Se aplica corrientes eléctricas que provoca la excitación de un material que al volver a su estado normal, emite luz fría
1.3.2 Quimioluminiscencia
Fenómeno que se produce en el trascurso de una reacción química
Aplicaciones
Técnicas de inmunoanalisis para cuantificar sustancias a muy baja concentración
1.3.3 Espectroscopia de fluorescencia (fluorimetría)
Proceso de emisión atómica y/o molecular que se produce cuando ciertas moléculas absorben luz de una determinada longitud de onda, y emiten luz de una longitud de onda superior a la absorbancia, es decir de menor energía
La luz emitida
en la fluorescencia tiene
menor energía
que el haz de luz incidente, por lo tanto, la luz emitida es de
longitud de onda mayor
que la correspondiente a la radiación absorbida o de excitación.
La intensidad y el color de la luz emitida son característicos de la sustancias fluorescentes y no tiene, necesariamente, el mismo color que la luz absorbida.
Técnica con una alta sensibilidad y especificidad
Instrumentación
Fluorimetros
utiliza filtros
Espectrofluorimetros
utiliza prismas
Fuente de luz de excitación, amplio espectro 250-800nm
Monocromador de excitación, emisión
Cubeta para muestras, pueden ser de cuarzo o sílice