PRUEBA DE LA OXIDASA
La prueba de oxidasa es un método diagnóstico que evidencia la presencia del complejo enzimático denominado citocromo oxidasa c.también conocida como indofenol oxidasa
Los citocromos son hemoproteínas que contienen hierro y completan el sistema citocromo
Características del sistema citocromo oxidasa cEl sistema citocromo oxidasa c actúa de la siguiente manera
Principio de la prueba
Reactivo de oxidasa de Kovacs
REACTIVOS
Este sistema funciona gracias al transporte de electrones a partir de sustancias donadoras como Nicotinamida adenina dinucleótido hacia sustancias receptoras, en este caso el oxígeno.
Esto da como resultado que se produzca energía (ATP) y agua o peróxido de hidrógeno, dependiendo del sistema de citocromo oxidasa que posea el microorganismo
Los microorganismos oxidasa positivos utilizan el oxígeno para generar energía a través de la respiración aeróbica
Principalmente se utilizan colorantes como el parafenilendiamina y el indofenol, que actúan como sustratos receptores y donadores de electrones artificiales.
eactivo de Kovacs, reactivo de Gordon y McLeod, reactivo de Nadi, reactivo de Carpenter, Suhrland y Morrison, y uso de discos de oxidasa
Trasvasar a un frasco color ámbar de capacidad suficiente y completar el volumen a 100 ml con agua destilada
Se rotula como reactivo de oxidasa de Kovacs, para diferenciarlo del reactivo de Kovacs utilizado para revelar la prueba del indol
Se calienta sutilmente hasta su disolución total
El reactivo de Kovacs se prepara disolviendo 1 gr en 50 ml de agua destilada
Con un pequeño papel de filtro añadimos reactivo de Kovacs, lo impregnamos y a partir del tubo con la bacteria problema tomamos un poco con el asa bacteriologica y ponemos en el papel. Tras unos 30 segundos, observamos si ha ocurrido algún cambio.
Una reacción positiva se evidenciará con este reactivo con el cambio de color de la colonia a lavanda, a púrpura casi negro
Una reacción negativa se evidencia porque no hay cambio de color de la colonia o esta toma una ligera coloración rosada
