Na frente vai a enzima Topoisomerase, que relaxa a dupla hélice, seguido da Helicase, que quebra as pontes de hidrogênio, abrindo a dupla hélice.
A fita de cima é chamada fita líder pois se encontra na orientação correta 3’➞ 5’ para atuação da DNA pol (5’➞3’) e a fita de baixo chamada de fita descontinua ou retardatária, pois encontra-se no sentido de orientação contraria 5’➞3’ de atuação da DNA pol.
Na medida que a helicase vai abrindo a dupla hélice, a primase adiciona um segmento curto de RNA, chamado de primer no inicio da fita molde (3’-5’), que reconhecido pela DNApol vai sintetizando a fita líder. O primer será depositado na fita descontinua 5’-3’ ao passo que a helicase abre a fita.