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TÉCNICAS BIOQUÍMICAS (I) 1.2 Espectrofotometría de absorción - Coggle…
TÉCNICAS BIOQUÍMICAS (I)
1.2 Espectrofotometría de absorción
1.2.4 Análisis de sustancias mediante fotometría de absorción
Se realiza la determinación en la muestra biológica de
Concentración del analito
Actividad de numerosas enzimas
Presencia / ausencia del analito
Podemos clasificar los métodos analíticos espectroscópicos en:
Según el tipo de medida
Métodos
a punto final
Se incuba una solución que contiene la muestra y los reactivos durante el tiempo necesario, y en unas condiciones predeterminadas
La concentración del analito es directamente proporcional a la concentración del producto / s formados o de forma indirecta
Método a punto final ajustando el espectrofotómetro con el blanco
Método a punto final con medida del blanco
Métodos
a dos puntos
Útil para evitar interferencias, se realizan dos valores de absorbancia en dos momentos distintos del proceso
Métodos
cinéticos
Se determina la variación de la absorbancia en el tiempo
La medida de la absorbancias se realizan antes de que concluya la reacción
Los valores de absorbancia son debido a
Aparición / desaparición de sustancias capaces de absorber la longitud de onda optima
Variaciones en la concentración del propio analito
Según el tipo de reactivo empleado
Métodos colorimétricos
Se denominan así a las reacciones analíticas que se miden empleado longitudes de onda dentro de la zona
visible
del espectro
También se pueden denominar así haciendo referencia a un tipo de
*reactivos
, los
cromógenos
, sustancias coloreadas o capaces de formar compuestos coloreados y por tanto, absorben en el visible
Los
cromógenos
pueden
Unirse al analito y formar un compuesto coloreado
Aparecer en el medio como consecuencia
Desaparecer a causa de la presencia del analito
La intensidad del color o su variación, es directamente proporcional a la concentración del parámetro a determinar
Métodos enzimáticos
Son aquellos métodos analíticos en las que alguno(s) de los reactivo(s) son enzimas
No tienen porque ser métodos donde lo que se mida sean actividades enzimáticas
1.2.3 Aspectos prácticos
1.2.2 Componentes basicos
1.2.1 Leyes de la absorción