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TÉCNICAS BIOQUÍMICAS (I) 1.1 Introducción a la espectrofotometría - Coggle…
TÉCNICAS BIOQUÍMICAS (I)
1.1 Introducción a la espectrofotometría
1.1.3 Interacción de a luz y la materia
Niveles energéticos
Configuración electrónica
. electrones ocupan niveles energéticos que definen los
orbitales
.
Disposición espacial
se localizan alrededor de los dos centros atómicos conocidos como
orbitales moleculares
.
Cada partícula
puede presentar
unos determinados niveles energéticos
,
la absorción o emisión de energía radiante
únicamente puede realizarse mediante
fotones de una frecuencia especifica y común para todos los átomos o emasculas de la misma especie
.
Un haz de luz puede dar dos fenómenos
Absorción
. Existe una perdida de intensidad de la radiación al atravesar la sustancia.
Emisión
En estado excitado libera su energía y vuelve a su estado de reposo.
Cada
cromógeno
tiene un
espectro de absorción característico
que expresa
la relación existente entre la longitud de onda incidente y la absorbancia
.
Los
espectros de absorción
es el conjunto de bandas que indican la cantidad de luz absorbida por una sust. a diferentes valores de longitud de onda y es único o característico de cada sust.
Son útiles en
espectrofotometría
para seleccionar la (λ) para la cual la absorbancia es max.
La medida de la cantidad de luz absorbida por una sustancia coloreada se basan algunas
técnicas espectroscópicas
.
Cuando un rayo luminoso con una energía de magnitud E incide sobre un recipiente de vidrio
Otra difundida o dispersada
Una parte es absorbida
Una parte es reflejada
Finalmente la energía restante emerge del cuerpo
1.1.1 Principios basicos
La espectroscopia
, estudia la capacidad de las moléculas de absorber y emitir radiaciones electromagnéticas.
Los
métodos ópticos
miden la radiación electromagnética que enema o interactúa con la materia.
Métodos espectroscópicos
La radiación emitida
. metodos espectroscopicos de emision como rayos X, fluorescencia atomica, fluorescencia molecular, fosforescencia (VIS o UV)
La radiación absorbida
. métodos espectroscópicos de absorción como rayos X, el UV, VIS, IR...
Métodos no espectroscópicos
miden cambios en la dirección de la propagación de la luz, como la refractometría.
En el
laboratorio de bioquímica
se utiliza para
identificar y/o cuantificar
una sustancia medir la intensidad del color del analito. Para ello se utilizan
métodos colorimétricos
.
La espectrofotometría
técnica cuantitativa de análisis químico que utiliza luz para medir la concentración de las sustancias químicas.
En función del color del analito, variara el tipo de radiación electromagnética absorbida y/o emitida
. A su vez
en funcion de la intensidad de su color, se puede establecer una correlación con la intensidad, a mayor intensidad, mayor concentración
.
En los
laboratorios de análisis clínicos se utiliza fundamentalmente la espectrofotometría de absorción molecular del ultravioleta y visible
.
1.1.2 Naturaleza de la luz. Conceptos básicos
La
luz visible
para el ojo humano 380nm hasta 780nm.
La luz solar es la suma de todas la longitudes de ondas correspondientes a las radiaciones del espectro visible denominada
luz blanca
.
Diferentes frecuencias
policromática
.
De una sola frecuencia
monocromática
.
Cuando las
ondas electromagnéticas se ordenan
de acuerdo con su frecuencia o su longitud de onda, la disposición ordenada se llama
espectro electromagnético
.
Parámetros y características físicas de la radiación
El
color
. Cada color del espectro visible se corresponde a
una determinada (λ)
.
La
energia (E)
. de un fotón depende de su (v) y de su (λ)
La
intensidad
se percibe el color se
asocia con la (A)
.
Como radiación electromagnética, la luz se define por:
Periodo (T)
Tiempo en seg tarda una partícula en realizar un ciclo completo.
Frecuencia (v)
Estos dos parámetros , v y λ son inversamente proporcionales: (a mayor λ menor v) (a menor λ mayor v).
Cuanto mayor es la (v) mayor es su (E). Cuando mayor es la (λ) menor es su (E).
Longitud de onda (λ)
Distancia entre dos max. de un ciclo completo.
Amplitud (A)
Altura de la onda según el eje de ordenadas.
Como partículas
: ademas de como onda se puede comportar como una partícula de energía o
fotón
.
Como ondas
: son oscilaciones producidas por campos eléctricos y magnéticos que vibran perpendicularmente entre si
Técnicas espectrométricas
Absorción
Molecular
UV-VIS
Infrarrojo
Atómica
Emisión
Molecular o luminiscencia
Fluorescencia
Fosforescencia
Atómica
Dispersión
Turbidimetría
Nefelometría
Refracción
Refractometría
Reflexión
Fotometría de reflectancia