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Métodos de fragmentación y lisis celular - Coggle Diagram
Métodos de fragmentación y lisis celular
No mecánicos
Menos agresivos que los mecanicos, no generan grandes daños a las celulas,
más especificos
, no muy eficientes
Enzimáticos
Método rapido, preciso pero de elevado costo, Necesita la compresión de la pared.
Liticasa
Rompe enlaces 1,3 glucano de levadura
Lisozima (Muramidasa)
Enzima de 14, 4 kilodalton
Proteasas
Inhibe proteasas. Rompe enlaces de pared, membrana e interacciones celula-celula. SIEMPRE debo usar proteasas para segregacion de tejidos y separar una celula de otra
RNAasa
Nucleasa que degrada ARN
Químicos
Detergentes
Se une a la fracción no polar de las membranas formando micelas, se desconfigura la bicapa fosfolipidica
Quelantes de EDTA
Quela iones Ca2+ y Mg2+
Solventes orgánicos
Permeabiliza las membranas celulares disolviendo componentes hidrofóbicos
Cloroformo y tolueno
Alcalisis
Saponifican lipidos de membrana
Hiroxido e hipoclorito de sodio
Agentes catrópicos
Interfieren en los enlaces no covalentes, debilitando interacciones entre solutos, haciendolo menos hidrofobico
Urea, Clorhidrato de guanidine
Físicos
Descompresión
Baja la presión de una camara,el gas entra a la celula y causa lisis
Termolisis
Altas temperaturas, rompe y debilita membranas
Congelamiento/ descongelamiento
Varios ciclos de congelacion y descongelacion en nitrogeno liquido, forma critales de hielo que rompe membrana
Shock osmotico
Método fisico mas simple
. Células incubadas en soluciones hipotonicas e hipertonicas
Mecánicos
Son fuerzas de corte, inespecificos,
mas efectivos
que los quimicos, procesos de fricción con elevadas temperaturas y mucha energia. Pueden dañar productos labiles y puede ser dificl la separacion del producto.
Todos traen aumento de temperatura
Homogenizadores de alta presion
Se aplica presion forzando celulas a través de una valvula sometiendolas a estres de corte.
El mas utilizado para disrupcion celular a gran escala
Molinos a esferas
Un agitador de disco montado sobre un motor central que gira.
Considerar: tamaño de esperas, velocidad de agitacion, temperatura de trabajo, velocidad de flujo y concentracion de la suspension
Sonificadores
Sondas de ultrasonido entre 20 y 50 kHz. Ondas hacen burbujas que crean una cavitación dentro de la célula
Los que mas se utilizan
Es muy dificil de estandarizar tiempo y ondas en el impacto que van a tener sobre el tejido
Agitación de perlas de vidrio
Perlas pequeñas que por movimiento rompen paredes y generan calor