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Batteriofagi (ΦX174 (Proteina A* (Blocca sintesi DNA ospite, Re-traduzione…
Batteriofagi
ΦX174
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Geni sovrapposti, genoma troppo piccolo, viene letto più volte con diverse ORF
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Da forma replicativa, con cerchio rotante si ottengono molte copie del filamento + (nuovi genomi fagici ssDNA)
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Solo filamento - fa da stampo, non è semiconservativa
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M13
Fago filamentoso elicoidale, ssDNA
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Non provocano lisi dell'ospite, no placche, ospite ne produce continuamente senza morire
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Spoliazione, ssDNA+ replicato da DNApol grazie anche a proteina pilota, forma replicativa dsDNA crea nuovi ssDNA+ grazie a cerchio rotante
Proteine del capside inserite nella membrana, proteina pilota guida il DNA verso la membrana, mentre genoma esce viene coperto da proteine capside
Fago λ
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Dopo iniezione nel batterio genoma λ circolarizza con estremità adesive sfruttando DNA ligasi batteriche
5 unità genomiche, diversi promotori
Pl e Pr
Divergenti, no attivatori trascrizionali, precoci
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PrE
Serve regolatore positivo CII, controlla espressione gene cI
PrM
Richiede CI regolatore positivo, controlla repressore ciclo litico (CI)
Fasi trascrizione
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Tardiva
Trascrizione da Pg, localizzato dopo Q e prima di S
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Replicazione λ
2 fasi
Precoce
Complesso nucleoproteico gpO, gpP e DnaB codificata dal batterio che si assemblano su ori formando bolla di replicazione
Tardiva
Transizione da modalità theta a cerchio rotante, produzione di concatameri
Ciclo lisogenico
Profago
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CI blocca geni litici, impedisce infezione nuovo λ
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"Scelta"
2 promotori
PrM
Verso sinistra, promotore di cI
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PrE
Verso sinistra, promotore di cro
Richiede CII, è represso da CI
Operatore in comune: da dx a sx, Or1, Or2, Or3
CI
Omodimero, 2 teste e un braccio
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Alta concentrazione CI: sito Or3 occupato, trascrizione cI repressa
Cro
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Quando Or3 (bassa Cro) è occupato, PrM represso, ad alta conc. di Cro anche Or1 viene occupato reprimendo anche Pr
CII
Promuove prima trascrizione di cI, quando c'è abbastanza CI da autoindurre la propria trascrizione da PrE CII non serve più
CII inattivata da proteasi attive in terreno ricco: se carenza di nutrienti, proteasi inattive (assenti), CII attiva CI che reprime ciclo litico
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T4
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Penetrazione
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Interazione fibre con LPS, spine si retraggono, parte centrale della coda entra in contatto con membrana
Lisozima produce poro, guaina caudale si contrae, DNA entra come se fosse "iniettato"
Genoma
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Replicazione
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Meccanismo a testa piena: testa fagica riempita con concatamero fino al massimo e poi taglio, non su sequenze specifiche
Batterio si protegge
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Endonucleasi
Restrizione, meccanismo generale
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Fago T4 si protegge da endonucleasi sostituendo citosina con 5-idrossimetilcitosina con gruppo idrossile glicosilato
Replicazione
3 gruppi di proteine
Precoci, intermedie, tardive
Genoma non codifica per propria RNA polimerasi ma per proteine che modificano RNA pol ospite (geni precoci)
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Successivamente prodotte proteine in grado di far trascrivere alla RNA pol geni intermedi e poi tardivi del fago
Impacchettamento
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3 fasi
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Motore di impacchettamento assemblato attorno ad apertura della prototesta, DNA spinto nella prototesta che si espande per la pressione, eliminate proteine di sostegno che c'erano prima
Si stacca motore, testa sigillata
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T7
dsDNA, testa icosaedrica, coda corta
Una proteina precoce inibisce sistemi restrizione ospite, prima ancora che sia entrato tutto il genoma virale
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Replicazione
Una origine, bidirezionale
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Si formano concatameri ma vengono tagliati e separati in siti specifici, no permutazioni circolari, no testa piena