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CLONAGEM GÊNICA (ETAPAS (1 (Obtenção e preparo do DNA (utilizando enzimas…
CLONAGEM GÊNICA
Inserção de fragmentos de DNA em
vetores
Vetores
: capazes de serem introduzidos ou replicados em
células hospedeiras
Célula Hospedeira
: fácil manipulação e rápido crescimento
Vetor
Moléculas de transporte
DNA circular ou linear
Fagos
Cosmídeo
Sítios
únicos
de restrição
Marcadores
selecionáveis
Gene resistente a antibiótico
Lac Z
colônias azuis
operon LAC
β-galactosidase
lactose ---> galactose + glicose
Plasmídeo
Polylinker ou MSC
Região promotora (
ori
)
garantia da
replicação
do vetor dentro da célula
Gene de resistência a antibiótico
seleção
e
identificação
Clonagem Molecular
1
Inserto + Vetor =
DNAr
estudo de genes
sequenciamento de genomas
proteínas raras e/ou de importância médica
transgênicos
2
DNAr + célula hospedeira =
Transformação
ETAPAS
1
Obtenção
e
preparo
do DNA
utilizando
enzimas de restrição
2
Inserto + Vetor de clonagem
3
DNAr introduzido em célula hospedeira
4
Replicação
do Vetor recombinante em células hospedeiras
5
Seleção
e expansão de clones individuais
6
Isolamento
e
análise
dos insertos