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ELETROFORESE: aplicada à análise de DNA (Influenciada por (conformação do…
ELETROFORESE: aplicada à análise de
DNA
TAMPÕES
pH alcalino
TBE
moléculas
pequenas
(< 1Kb)
maior tempo
maior poder tamponante
TPE
TAE
moléculas
grandes
menor tempo
menor poder tamponante
maior poder de resolução
Alta concentração = alta força iônica = CALOR -
Desnaturação do DNA
DNA: Carga NEGATIVA
Migração do DNA ao polo
POSITIVO
Separação de moléculas carregadas em um
campo elétrico
MATRIZ ou GEL (trama de polímeros)
Gel de
Poliacrilamida
poros pequenos
maior tempo
maior poder de resolução
fragmentos
pequenos
cuba
(vertical)
Gel de
Agarose
campo elétrico aplicado
diferentes concentrações
polissacarídeo de
algas marinhas
fragmentos
grandes
menor poder de resolução
fonte
(horizontal)
80 Volts
DNA: Diferentes tamanhos e concentrações
DNA Genômico
denso e irregular
difícil migração
DNA Plasmidial
bandas
enoveladas
migração rápida
estendidas (filamentosas)
migração lenta
Visualizado por
corante
em corrida eletroforética
EtBr
Blue Green Loading Dye
Influenciada por
conformação do DNA
tamanho da amostra
tamanho do gel
voltagem
tempo
tampão