Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
Molekylärbiologiska metoder (PCR (Hur går det till? (Behöver (templat, DNA…
Molekylärbiologiska metoder
PCR
polymerase chain reaction
faderskapstest
och brottplatsutredning
DNA
Hur går det till?
Behöver
templat
DNA-polymeras (Taq, som trivs vid hög värme, därav påverkas de inte av denatureringen)
Primrar (DNA-bitar), sänka värme då
dNPS
Gör
denaturera, värme för att bryta upp vätebindningarna 95 C
hybridisering, sänka värme 55 C så att primär kan binda in, skapa 3-prim-ändar så att polymeraset kan fortsätta
polymerisering (höger temp 72 C), polymeraset binder in, då har vi gått från 1 DNA-bit till 2 st
upprepa detta 30x
detta resulterar till 1 billion korrekta DNA-bitar och 22 okorrekta
härmar replikationen
Elektrofores
faderskapstest
och brottplatsutredning
DNA
separera laddade molekyler
gel bestående av agaros, som har hål/brunnar där DNA:t ska placeras
tillför spänning över gelen (-) ----> (+)
DNA:t kommer ta sig till den positiva sidan
En kort DNA-bit kommer vara snabbare/ta sig längre än en lång bit
Separera DNA-bitar beroende på deras längd
DNA-sekvensering
DNA
NTP
dNTP (O försvinner från molekylen)
ddNTP (två O försvinner ), då blir det stopp då denna molekyl inte kan binda till ngt annat NTP
polymeras behöver dATP, dGTP,dCTP, dTTP men även ddATP eller ddGTP eller ddCTP eller ddTTP i lösningen PCR
polymeras syntetiserar tills en ddATP tillsätts som talar om för polymeras att sluta syntetisera
beroende på vilken sekvens man vill ha finns olika dd' som används som stopp
dATP talar om att det finns ett T på DNA-strängen, likt som dTTP talar om att det finns ett A
ta reda på om det finns mutationer
Microarray
hybridisering
kollar på mRNA
jämföra en sjuk cell med en frisk
revers transkriptas
mRNA (för sjuk vs frisk cell)-->RNA--->DNA-->CDNA
tillsätter RNAse, ett enzym som klipper RNA (RNA förstörs) och höger temp 95 C
DNA, dNTP, DNA-polymeras, primar
CDNA = komplementärt DNA
jämföra de två olika cellerna med varandra via hybridisering på en microrray som kommer visa sekvens-specifika uttryck via färger
Rekombinant proteinuttryck
DNA-mRNA-Protein
Test
faderskapstest
finns gener som kallas STR = short tandem repeats
dessa fyller ingen funktion men det är specifikt för individen och sitter på kromosomen 3
pappan STR är kortare än mammans
utförs av PCR med primära som binder utanför STR-område
Dessa DNA-bitar placerar man sedan i elektrofores
Hur kan detta hjälpa att identifiera om barnet är föräldrarnas barn??
Man gör en tabell med barnet, mamman och pappan
en kromosoms längd måste matcha vardera föräldrar, dvs en kromosom från pappan (samma längd), den andra kromosomen från mamman (samma längd)
brottsplats
samma sak som faderskapstestet
jämför vem som matchar den skyldiga