Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
3.1 Lääkeaineen pitoisuuden määrittäminen näytteessä HPLC-UV-menetelmällä
3.1 Lääkeaineen pitoisuuden määrittäminen näytteessä HPLC-UV-menetelmällä
Koeasetelma:ASA
Standardinäytteet
10mg/ml kantaliuos etanoliin
laskuvirheet, punnitusvirheet, liukeneminen
laimennokset
laskuvirheet, pipetin käyttö, sekoitus
suodattaminen
suodatusjärjestys
huuhtelu seuraavalla liuoksella
analyysipullojen merkitseminen!!!
Näyteliuokset
Rasitus ASA: ASA-pitoisuus selvitettävä
Vanha ASA 0,1%
Tuore ASA 0,1%
Tuoreesta, vanhasta ja rasitus ASA:sta tarkat 1/3 laimennokset
suodatetaan analyysipulloihin
merkitse pullot!!
suodatusjärjestys!
HPLC-UV.analyysi
Kromatogrammeista ASA:n piikki
Standardinäytteiden pinta-alojen avulla kalibraatiosuora
Kalibraatiosuoran avulla näyteliuosten pitoisuudet
HPLC-UV-menetelmä
Perusteet
Pumput pumppaavat liikkuvaa faasia kolonnin läpi detektorille
Detektori (UV-spektrometri) mittaa näytevyöhykkeiden absorbanssit.
Tiedonkeruulaite muuttaa detektorin datan kromatogrammiksi
Näytteiden analysointi
piikin koko on suoraan verrannollinen tutkittavan aineen pitoisuuteen
retentioajat kullekkin yhdisteelle spesifiset
aineen tunnistaminen
tuntemattoman näytteen pitoisuus saadaan standardisuorasta
kolonnissa kiinteä faasi on pooliton, liikkuva faasi poolinen
Pooliset yhdisteet eluoituvat nopeammin (retentioaika)
liikkuva faasi usein puskuri (pH:n vaikutus minimoidaan)
Merkitys
Lääkeaineen erottaminen
apuaineista
Hajoamistuotteista
muista epäpuhtauksista
pitoisuus tarkempi kuin UV-Vis-menetelmällä
soveltuu epäorgaanisten, orgaanisten ja peptidien analytiikkaan
pitoisuuden määrittäminen
stabiilisuustutkimukset
metaboliittien analysointi
lähisukuisten yhdisteiden tutkiminen
puhtauskokeet
Virhelähteet
Näytteitä ei suodatettu
laitteisto voi mennä tukkoon (kiinteät partikkelit ja ilmakuplat)
puskurin saostuminen
epäpuhtauksia analyysiin
ajoliuoksista ei ole poistettu ilmaa
ilmakuplat haittaavat pumppujen ja detektorin toimintaa
Liikkuva faasi ei liiku kunnolla, retentioajat
pH-muutos vaikuttaa retentioaikaan
Punnitus-
ja mittaustarkkuus
hävikki
punnitusastia
koeputkien reunat
Laimennostarkkuus
tilavuudet muistiin!
Standardinäytteiden pitoisuudet väärät
standardisuora virheellinen
laimennossuhteta ei huomioitu laskuissa
analyysipullojen sekoittuminen
virtausnopeuden muutos
retentioajat normaalia suurempia
Laskuvirheet
väärän kaavan käyttö
väärät arvot
näppäilyvirheet