Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
3.1. Lääkeaineen pitoisuuden määrittäminen näytteessä HPLC-UV -menetelmällä
3.1. Lääkeaineen pitoisuuden määrittäminen näytteessä HPLC-UV -menetelmällä
HPLC-UV -menetelmä
HPLC = korkean erotuskyvyn nestekromatografia
käyttö
yhdisteiden erottaminen
yhdisteiden tunnnistainen
yhdisteiden kvantitatiivinen analyysi
toimintaperiaate
yhdisteet kulkevat liikkuvan faasin mukana
kolonniin ja viipyvät kolonnissa
eri ajan riippuen vuorovaikutuksesta
stationaarifaasin kanssa
käänteiskromatokrafia: kolonni on pooliton
-> poolittomat yhdisteet viettää siellä pidemmän ajan
eluentti liian hydrofobinen
myös poolittomat yhdisteet
eluoituvat nopeasti
eluenttia muutamalla
eluetoitumisnopeutta voidaan muuttaa
deketori tunnistaa kolonnista
erottuneet yhdisteet,
ja muodostuvan kuvaajan
perusteella voidaan tunnistaa ryhmät
yleisin UV-detektori
tulosteena UV-absorbanssi ajan funktiona
koeasetelma
tehdään ASA:sta 3 eri liuosta,
josta tehdään laimennokset
tuore 0,1 M ASA jauheesta
rasitusolosuhteissa säilytetystä ASA liuoksesta
rasitusolosuhteissa säilytetystä ASA jauheesta
punnitusvirhe, mittausvirhe tai
liian epätarkka automaattipipetin arvo
saadaan teoreettiseksi
pitoisuudeksi väärä arvo
pitoisuus prosentteina virheellinen
merkataan laimennosvaiheessa
pullot huonosti
-> sekoitetaan astiat
tehdään 5 kpl standardinäytteet,
joiden pitoisuudet 100-500 ug
laskuvirheet
laimennossarja vääristyy,
jolloin kuvaajasta tulee virheellinen
tutkittavien näytteiden pitoisuuksista väärät
punnitus/mittausvirhe tai
epätarkka pipetin arvo
standardisuorasta virheellinen
näytteen pitoisuudeta tulee virheellinen
standardinäytteiden kromatogrammeista
saadaan ASA:n eri pitoisuuksien pinta-alat
tehdään kalibraatiosuora pitoisuuden ja
pinta-alan perusteella
-> saadaan laskettua tutkittavien
näytteiden pitoisuudet
laimennosten virheet
verrataan pitoisuutta teoreettiseen pitoisuuteen
tunnistetaan ASA kromatogrammeista väärin -> standardisuorasta tulee virheellinen, jolloin lopputuloksesta tulee väärä
näytteet ja ajoliuokset suodatetaan
ruiskusuodattimella
liukenemattomat aineet poistuu
ajoliuoksesta poistetaan ilma
suodatetaan väärässä järjestyksessä /
unohdetaan huuhtella seuraavalla liuottimella
pitoisuudet muuttuu
standardisuorasta virheellinen
näytteet laitetaan HPLC-laitteistoon,
jossa detektori piirtää kromatogrammin
sen perusteella, miten yhdiste läpäisee kolonnin
muut virhelähteet
punnitusvirheet / mittausvirheet
kalibraatiosuoran tai näytteiden pitoisuus muuttuu
huolimattomuusvirheet
laskuissa
työvaiheissa
yhdisteiden ja välineiden epäpuhtaudet
vaikuttaa kromatogrammiin
pitoisuus vääristyy
laitteen virheet
kolonni tukossa