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Purification & Analyse protéine recombinante (Purification…
Purification & Analyse
protéine recombinante
Purification
expression
protéine de fusion
GST-GR
DBD
Stratégie de clonage
promoteur tac
artificiel inductible
induction IPTG
IPTG bloque répresseur :arrow_right: induction
irréversible
gène Lac I
code pour oppresseur Lac
opérateur (binding site for repressor)=
promoteur UV5 lac
promoteur trp
incorporation site de restriction
par
amorces flottantes
enzymes de restriction compatibles
criblage bleu-blanc
gène LacZ code pr
fragment alpha beta-galactosidase
insert au milieu de lacZ
alpha-complémenta°
avec la bactérie
peptide omega
marqueur d'insert=X-gal hydrolysé
Chromatographie d'affinité
Analyses
Qualité de la purification
Rendement
=rapport d'activités totales x 100
Facteur de purification
=rapport d'activité spécifique
SDS-PAGE
système de Laemmli
pH=6.8
pH=8.8
Dosage de qté protéine
Bradford
Fonctionalité de la prot purifiée