Sang
Fonctions
A propos
7-8% du poids corporel
pH : 7.35 - 7.45
homme : 5-6 L ; femme : 4-5 L
T° + élevée que celle du corps
Viscosité + élevée que l'eau
Régulation
Protection
Transport
Déchets du métabolisme cellulR
Hormones
Oxygène & nutriments
Maintien de la température corporelle
Maintien d'un pH normal dans les tissus
Maintien d'un volume adéquat de liquide
Prévention de l'infection
Prévention de l'hémorragie
Plasma
Plaquettes/Thrombocytes (2-4µm)
Globules blancs/Leucocytes (1%)
Composition obtenue par mélange du sang avec de l'héparine (agent anticoagulant) puis centrifugation
Globules rouges/Erythrocytes/Hématies
Hématocrite : (Volume de globules rouges dans l'échantillon)/(Volume total de sang dans l'échantillon)
Hématocrite nouveau né > homme > femme +/- enfant
Nutriments (glucose, aa, ...)
Déchets métaboliques (urée, ...)
Electrolytes : ions sodium, calcium, chlorure, phosphate, bicarbonate
Gaz (dioxygène, dioxyde de carbone)
Protéines (8%) (Albumine [principalement [assure transport de molécules liposoluble + maintien pression osmotique]], globulines, facteurs de coagulation [si on les enlève on obtient le sérum [pour analyse]], enzymes métaboliques [biomarqueur & peut montrer atteinte à un tissu : si cellule meurt, elle relâche ses enzymes spécifiques], hormones
Eau (90%)
Analyses
Analyse quantitative : numérotation (grâce la chambre de comptage de Neubauer)
Analyse morphologique : observation de frottis sanguins
Il y a 1000x plus d'érythrocytes (E12.L-1) que de leucocytes (E9.L-1) et 10x plus que de plaquettes (150-400E9 --> varie selon les individus et appareils de mesure). Si comptage manuel, mesure en nbre.mm-3 [divisé par 10^6]
Structure
Disque biconcave d'environ 2µm d'épaisseur et 7,5µm de diamètre (normocyte)
Tailles anormales : >9µm = macrocyte; <6µm = microcyte; Anisocytose = mélange d'érythrocytes de tailles normales et de tailles anormales
Caractéristiques
Les érythrocytes n'ont pas d'organelles (noyau inactif chez le fœtus) --> production d'énergie par mécanismes anaérobiques par des enzymes dans le cytoplasme qui proviennent de l'origine de la cellule (incapable de synthétiser des protéines) --> 1/2 vie de la cellule = 120 jours environ
Forme de disque biconcave représente adaptation de la structure d'une cellule à sa fonction --> rapport surface/volume favorable --> chaques points à l'intérieur de la cellule est proche de la membrane : favorise les échanges gazeux
Incapacité à maintenir forme biconcave entraîne la destruction du globule rouge MAIS possibilité de se déformer temporairement pour passer à travers des plus petits capillaires [diamètre = 3-4µm]
Le transport de l'oxygène (1 milliard de molécules d'oxygène/cellule) par les globules rouges se fait grâce à l'hémoglobine présente dans le cytoplasme (30pg/cellule)
Cette protéines est composée de 2x2 unités identiques (alpha & bêta) et chacune d'entres elles possèdent des groupements hèmes contenant du fer qui va fixer l'oxygène
En cas d'oxydation du Fe2+ (ferreux) en Fe3+(ferrique), la capacité à fixer de l'hémoglobine (devenue méthémoglobine) est fortement diminuée --> globules rouges possède enzymes réductrice (Diaphorase [NADH-cytochrome b5 réductase]) qui vont protéger les globules rouges des péroxydes dangereux en réduisant la méthémoglobine en hémoglobine
La mutation récessive du gène codant pour la diaphorase entraîne l'apparition d'une méthémoglobine congénitale --> cyanose : l'enfant a un aspect bleuâtre car les tissus sont mal oxygénés
Taux normal d'hémoglobine : homme --> 133-177g.L-1, femme --> 117-157g.L-1, enfant (>2ans) --> 120-160g/L-1 et le nouveau-né --> 140-200g.L-1 (valeurs parfois en g.dL-1
Troubles érythrocitaires
Anémies (taux d'hémoglobine inférieur à la norme)
Nombre insuffisant de globules rouges
Diminution de la teneur en hémoglobine
Anémie pernicieuse (Maladie de Biermer) : carence en vitamine B12(due à une malasbsortption [due à une gastrite atrophique auto-immune]) essentiel pour la formation des précurseurs des globules rouges et pour la division cellulaire --> globules rouges grandissent mais ne se divisent pas --> macrocytes
Anémie ferriprive : manque de fer dans l'organisme --> moins de production d'hémoglobine dans le globule rouge --> microcytes
Anémie hémolytique : destruction des globules rouges (hémolyse) excessive
Anémie aplasique : baisse de la production de cellules rouges (cancer moelle osseuse, exposition aux rayons ionisants, aux produits toxiques)
Anémie hémorragique : après une hémorragie aigue
Thalassémie : absence/forte réduction de synthèse d'une sous-unité de l'hémoglobine
Anémie falciforme (Drépanocytose) : mutation ponctuelle de la chaine bêta de l'hémoglobine --> cellule prend une forme de faucille pouvant s'agréger et entraver la circulation dans les vaisseaux sanguins + les globules rouges se désagrègent rapidemment
50 millions de porteurs de la mutation dans la monde surtout en Afrique subsaharienne, Moyen-Orient, même localisation que la malaria/paludisme --> sélection naturelle car les porteurs de la mutation ont un avantage vis à vis des conséquences neurologiques de l'agent pathogène de la malaria
Polycythémies/Erythrocytoses
Polycythémie secondaire (adaptation physiologique) : lorsque le corps ressent un manque à long terme en oxygène (séjour en haute altitude par exemple) il va augmenter la production de globules rouges (pas autant que pour polycythémie primaire) pour oxygéner au mieux l'organisme
Polycythémie artificielle : dopage sanguin dans le but d'augmenter l'oxygénation
Polycythémie primitive (Maladie de Vaquez) : hématocrite > 0,8 (production élevée de globules rouges) le plus souvent due à la mutation de la protéine kinase JAK2 (qui active la production de globules rouges en présence d'érythroprotéine) qui est en permanence activée même sans érythroprotéine
Cellule anuclée et RER absent : pas de synthèse de nouvelles protéines mais présence de glycogène et de mitochondries : production d'énergie possible (anaérobique lorsque les plaquettes sont dans les tissus endommagés car l'oxygénation baisse)
Présence de granules
Granules delta (corps denses)
Granules lambda
Granules alpha
Protéines spécifiques des plaquettes
PDGF stimule le processus de cicatrisation (réparation des vaosseaux)
Protéines impliquées dans la coagulation
Sérotonine
ADP
Enzymes lyosomiales
Des microtubules situées sur la circonférence de la cellule permettent de maintenir une structure discoïde + permet le réarrangement structural afin d'adhérer de mieux adhérer o la paroi du vaisseau sanguin lésé
Principales étapes de l'homéostase (processus déclenché lors de la lésion d'un vaisseau)
Formation du clou plaquettaire : colmatage de la lésion par agglomérat de plaquettes (forme s'adapte à la plaie) qui libèrent le contenu de leurs granules : la sérotonine stimule la contraction des muscles lisses, la thromboxane A2 permet d'activer d'autres plaquettes de l'agglomérat en stimulant la libération de leur granules, l'ADP permet d'attirer de nouvelles plaquettes (réaction en chaîne)
Spasmes vasculaires : libération de facteurs provenant du tissu épithéliale ou du muscle lisse lésé --> réflexe de douleur + la vasoconstriction (contraction des muscles lisses du vaisseau sanguin afin de réduire l'hémorragie)
Coagulation : l'activation de la prothrombine (facteur Xa) [une protéase] par voie intrinsèque (faisant intervenir molécules sanguines) et par voie extrinsèque (faisant intervenir des facteurs relâchés par les tissus lésés) permet de catalyser la réaction produisant de la thrombine à partir de prothrombine. La thrombine va elle même transformer le fibrinogène (soluble dans la plasma) en fibrine (insoluble) qui va former un réseau empêchant les globules rouges de quitter le vaisseau sanguin
Si le tissu est coupé nettement, il y aura moins de libération de facteurs (car moins de cellules touchées
La prostacycline produite par le tissu épithéliale permet de restreindre l'action des plaquettes à la lésion
Diapédèse : processus qui permet aux leucocytes de quitter les vaisseaux sanguins pour se rendre sur le lieu de la liaison/infection
"Rolling" : Les sélectines de la membrane de la cellule endothéliale (E&P) réagissent avec les sucres correspondants sur la membrane du leucocyte et les selectines exprimées par la membrane du leucocyte (L) réagissent avec les sucres correspondants exprimées par la membrane de la cellule endothéliale --> leucocyte ralenti dans sa course et roule sur la paroi du vaisseau sanguin
Adhésion : lorsque les intégrines situées à la surface des leucocytes interraagissent avec les I-CAM (*Immunoglobulin Cell adhesion Molecule) alors le leucocyte est fixé à la paroi du vaisseau sanguin
Migration : leucocyte quitte le vaisseau sanguin pour se rendre sur le site de l'inflammation/infection, il est guidé par des gradients de concentration en facteurs chimiotactiques produit par les cellules déjà sur le site
Les leucocytes circulant au centre du vaisseau (cas normal) sont attirés par des sucres spécifiques de la membrane des cellules endothéliales exprimés au niveau de la zone d'infection/inflammation et qui sont ligands des sélectines (L) exprimées à la surface de leur propre membrane
Les modifications des combinaisons des protéines d'adhésion s'exprimant sur la membrane des cellules endothéliales (en fonction de l'infection/inflammation) permettent d'obtenir un recrutement préférentiel des leucocytes
Dans la plupart des inflammations aiguës, les neutrophiles quittent les vaisseaux en premier, puis monocytes + leucocytes mobilisés l'organisme accélère leur prolifération (nombre peut doubler en quelques heures = hyperleucocytose [détecté dans les analyses sanguines])
Si il y a des défauts génétiques dans l'expression des intégrines à la surface des leucocytes, ceux-ci ne peuvent adhérer aux vaisseaux sanguins et donc effectuer la diapédèse et se rendre sur le lieu de l'infection/inflammation --> Leucocyte Adhesion Deficiency (LAD)
Subdivision des leucocytes
Agranulocytes/Mononucléaires (cellules non lobées) relativement immatures : conserve capacité de se diviser et de se différencier
Granulocytes/Polynucléaires (noyau unique mais lobé et relié par de fin canaux non-visible à l'époque)
Monocytes (2-8%) [18µm ou + & 1/2 vie : qq mois dans la circulation]
Lymphocytes (25-40%) [lymphocytes circulants ne représentent qu'une faible fraction de tous les lymphocytes car la plupart sont dans les tissus lymphoïdes]
Eosinophiles (1-5%) [12-17µm & 8-12 jours de 1/2 vie]
Basophiles (0-1%) [14-16µm & 1/2 vie incertaine]
Neutrophiles (40-70%) [12-14µm de diamètre & 6h à quelques jours de 1/2 vie]
Noyau formé de 3-5 lobes (chromatine très condensée; chez les femmes le K X inactif et condensé est très visible = "drumstick") + RER et Golgi peu développés (presque pas de synthèse de protéines [déjà presque toutes les protéines pour le fonctionnement de la cellule à sa formation) + présence de glycogène afin de produire de l'énergie en milieu faible en oxygène (zones tissus endommagés
Granules
Azurophiles (la Myélopéroxidase fait précipiter cristaux bleuté [azur])/lyosomes/Primaires
Hydrolases
Lysozyme : possède une activité de dégradation des bactéries
Myélopéroxidase
Spécifiques/Secondaires
Collagénase
Lysozyme
Gélastinease
Lactoferrine : capable de se lier au fer nécessaire à la prolifération des bactéries (effet bactériostatique)
Opsonisation de la bactérie : Le recouvrement de la membrane des bactéries par les opsonines (anticorps + complément C3b)--> va favoriser la phagocytose car le neutrophile possède des récepteurs réceptifs des opsonines
Formation de phagosome : le neutrophile va enfermer la bactérie opsonisée dans une vacuole formée par fusion de protrusions membranaires (psesudopodes)
Fusion des granules avec le phagosome va entrainer la dégradation des bactéries + la détection de la fMLP [formyl-Met-Leu-Phe] (peptides issus de la dégradation des bactéries) par des récepteurs spécifiques exprimés par le membrane du neutrophile va déclenché une réaction en cascade dans le neutrophile qui va stimuler la phagocytose
La réaction en cascade va mener à l'activation de la NADPH oxydase qui va générer des ions superoxyde O2- qui vont réagir avec de l'eau afin de produire de l'eau oxygénée (toxique pour les bactéries) que la myélopéroxydase contenue dans les granules va faire réagir avec des ions chlorures afin de former de l'acide hypochloreux (également très toxique pour la bactérie) et ainsi accentuer la phagocytose
Si défaut génétique empêchant la synthèse NAPDH oxydase --> Maladie granulomateuse chronique : infction bactérienne à répétition au niveau des muqueuses car le phagocytose est inefficace
Quantité dans le sang varie au cours de journée (abondant le matin et le reste de la journée) + augmente en cas de maladies parasitaires & dans tissus spécifiques en cas de réactions allergiques + diminue par hormones corticostéroïdienne
Noyau formé de 2 lobes & chromatine très condensée + RER et Golgi peu développés --> peu active dans la synthèse de protéines + du glycogène afin de produire de l'énergie
Granules spécifiques : éosinophile (éosine chargée négativement [couleur rose/orange]), de grande taille + possède un agrégat de Major Basic Protein (P.I de 11 : très basique car formé principalement d'arginine) formant le cristalloïde (partie plus dense au centre des granules)
Protéine basique principale (+50% de la composition de la granule) contribue principalement à la destruction des vers parasites
Protéines cationiques
Péroxidase
Hydrolases permettant d'hydrolyser les protéines des objets phagocytés
Histaminases permettent d'inactiver les histamines et donc de jouer un rôle d régulation de la réponse inflammatoire et allergique
Fonction le plus importante = attaque des vers parasites (plathelminthes & némathelminthes) --> les oésinophiles s'attenchent à la membrane du parasite et relâchent leur granules dans l'environnement afin de détruire le parasite)
Activité phagocytique dirigée vers les particules opsonisées par des IgE car les éosinophiles possèdent des récepteurs à basse affinité FcepsilonRII (la liaison entre le recepteur et son ligand n'est que temporaire)
Noyau formé de 2 lobes & chromatine très condensée
Granules spécifiques de grande taille pouvant masquer le noyau(fixent des colorants basiques)
Histamine et autres substances vasoactives
Héparine = GAG anticoagulant
Facteurs mobilisant les autres leucocytes
Fonction principal des basophiles est probablement de combattre des parasites + pourraient participer à la coordination de la réponse inflammatoire
Lymphocyte inactif [5-8µm & 1/2 vie : jours à années]
Le noyau très dense occupe 90% du volume de la cellule + qq mitochondries
Lymphocyte B (15%) produits dans la moelle osseuse (bourse de Fabricius chez oiseaux, si on effectue une ablation --> incapacité à produire des anticorps ou immunoglobines
Possèdent des récepteurs à haute affinité pour les IgE (FcepsilonRI) : les IgE vont venir se fixer de manière permanente sur la membrane des basophiles, si un antigène reconnu par les IgE vient s'y lier, le basophile déclenche la dégranulation afin de le détruire
Chaque lymphocyte possède un récepteur B unique qui lui permet de détecter un antigène spécifique. En présence d'un antigène, le lymphocyte adapté est activé ce qui entraîne sa prolifération (expansion clonale [clones possèdent tous des récepteurs B correspondant à l'antigène]) puis ils sont différenciés
Les plasmocytes possèdent un noyau beaucoup moins dense et un cytoplasme plus vaste, un RER très développé de même pour l'appareil de Golgi, ceci permet la production en masse d'anticorps (Immunoglobines (1k/sec) qui vont venir se fixer sur les antigènes correspondant à l'anticorps produit
Les cellules mémoires vont rester dans les organes lymphoïdes pendant plusieurs année afin de pouvoir réagir plus rapidement en cas d'une 2e exposition à cette antigène
Les immunoglobines sont formès de 2 chaînes lourdes et 2 chaînes légères variable possèdent une partie spécifique à chaque classe d'immunoglobines (domaine Fc) et de 2 domaines reconnaissant l'antigène (Fab)
Classes d'immunoglobines
IgA : principaux anticorps dans les sécrétions (salive, lait maternel [transmis au nouveau né])
IgD : uniquement des anticorps membranaires
IgM : premiers anticorps formés lors de la réponse immunitaire
IgE : anticorps des réactions allergiques, se fixent aux basophiles et mastocytes (récepteurs à haute affinité)
IgG : principaux anticorps du sang et de la lymphe
Lymphocytes T produits dans la moelle osseuse et migrent vers thymus pour compléter leur différenciation & possède un recepteur T unique (différent de celui des lymphocytes B) spécifique à un marqueur spécifique sur la membrane des cellules (CD4, CD8, CD25)
Lymphocyte T cytotoxique (CTL)/CD8 : tue cellules tumorales/infectées par sécrétion de perforines (s'insèrent dans la membrane de la cellule et l'entrée d'eau dans le cellule entraîne la lyse de cette cellule) & granzymes (protéase qui va déclencher un programme d'apoptose --> mort de la cellule)
Lymphocyte T régulateur (Treg) : prévient l'activation du système immunitaire contre les consituants de son propre organisme --> prévient maladie autoimmunes
Lymphocyte T helper/auxiliaire/CD4+ : sécrètent des interleukines qui vont permettre d'aider dans leur fonction les lymphocytes B, T et les macrophages
Lymphocytes T auxiliaires = cibles du VIH qui va lyser la cellule quand il va se multiplier --> la réaction immunitaire est stoppée lorsque le taux de lymphocyte TCD4 est trop bas --> SIDA
Mutations sur le gène codant pour le facteur de transcription FoxP3 (normalement exprimé par les LTreg) entraînent le syndrome IPEX (Immuno-dysregulation Polendocrinopathy auto-immune Entheropathy X-linked) chez les nouveaux-nés mâle (car sur KX donc mutation forcement dominante), développement de pathologies auto-immunes sévères --> rapidement fatale pour le nourrisson
Lymphocytes "Null"
Cellules souches (lymphocytes en puissance)
Natural killers (NK) font partie du système immunitaire inné, capable de reconnaître cellules cancéreuses/infectées et de les détruire (granules sécrétant perforines et granzymes) si elles n'expriment pas les protéines de l'histocompatibilité spécifique à l'organisme
Noyau excentré et un cytoplasme riche en organelles (légèrement + basophile que les autres leucocytes)
Monocyte = précurseur des macrophages, histiocytes, cellules dendritiques, celluel de Kuppfer [foie] et ostéoclastes
Hématopoïèse : processus par lequel les éléments figurés du sang [globules rouges, blancs et plaquettes] se forment; régulation fine qui permet d'augmenter/diminuer production de cellules particulières selon les besoin
S'effectue dans le sac vitellin au début du développement, puis dans le foie et la rate (prénatal) puis essentiellement dans la moelle osseuse hématopoïétique [principalement située au niveau du crâne, du sternum, des côtes, des vertèbres, du bassin et de l'épiphyse] durant la période postnatal
Stroma
Parenchyme (tissu dont les cellules ont une activité physiologique, par opposition aux tissus de liaisons et de soutien)
Précurseurs des éléments figurés
Cellules réticulaires
Macrophages permettent de détruire les cellules sanguines anormales
Adipocytes
Capillaires sinusoïdales : capillaires sanguins de plus grand calibre, les cellules sanguines formées partent dans la circulation par là
Après la phagocytose, le neutrophile ne peut plus reproduire de granules et meurt
Les cellules présentatrices d'antigène (macrophage/cellules dendritiques) peuvent exprimer à leur surface (grâce au complexe majeur d'histocompatibilité de type 2) l'antigène de pathogène phagocyté à leur surface, il va alors être reconnu par le lymphocyte helper correspondant par son récepteur CD4, ce qui active sa fonction
Mis en évidence car en irradiant une souris puis lui injectant de la moelle osseuse d'une cellule non irradiée, on remarque la formation d'une CFU (Colony-Forming Unit) compose des cellules de l'autre souris (et qui vont permettre de reformer toutes les cellules sanguines] dans la rate de la souris irradiée qui survie
Si on met en culture des cellules isolées à partir de la moelle osseuse on remarque que ce sont des CFC (Colony-Forming Cell) car on obtient des colonies composées d'un type de cellule ou bien des colonies composées de cellules différentes
Erythropoïèse (stimulée par l'érythropoïétine [EPO])
Cellules précurseurs non identifiable : BFC & E
Proérythroblaste : euchromatine et nucléoles bien visible + grand nbre de ribosome (cytoplasme basophile) --> très actif dans la production de protéines (hémoglobines)
Toutes les cellules sanguines proviennent de la PHSC (Pluripotent Hematopoietic Stem Cell) cellule pluripotente qui se multiplie afin de pouvoir avoir un poll constant de cellules souches et qui va se différencier sous l'influence des facteurs de croissance afin d'obtenir des cellules sanguines différentes
Le précurseur "GEMM" est une cellule pluripotente à l'origine de toutes les cellules sanguines sauf les lymphocytes
Les changements entre ces cellules pluripotentes ne sont pas vraiment identifiables sauf par les différences d'expression des gènes
Après 2 divisions, on obtient une Erythroblaste basophile : la chromatine est + condensée et le cytoplasme est toujours basophile
Après 2 divisions, on obtient un Erythroblaste polychromatophile : chromatine + condensée & le cytoplasme fixe à la fois le colorant basique (ribosome encore en grande quantité) et le colorant acide (hémoglobine en grande quantité)
Erythroblaste ortochromatophile/acidophile : noyau extrêmement dense [pycnotique] (inactif) & cytoplasme acidophile à cause de l'hémoglobine en grande quantité et la baisse de la quantité de ribosomes
Après expulsion du noyau, on obtient un réticulocyte : les organelles sont toujours présents mais équipé totalement --> part dans la circulation par les capillaires sinusoïdales --> présent à 1% dans composition en globules rouges du sang & biomarqueur de l'érythropoïèse (si très présent, bcp de production de globules rouges)
1 jour plus tard, les organelles sont éliminé et on obtient un Erythrocyte mature Erythrocyte
Thrombopoïèse ❓ ( process dure environ 4-5 jours & stimulé par la thrombopoïétine [TPO])
Cellule précurseur non identifiable : Meg
Mégacaryoblaste procède à des endomitoses (les chromosomes se dédoublent mais le noyau non) puis se différencie
Mégacaryocyte : [>100µm] et noyau plurilobé et polyploïde (16-32N); la cellule est placée à côté des capillaires sinusoïdales afin d'y déverser un ruban de plaquettes, plus la cellule est grande, plus elle peut produire de plaquettes Plaquettes
Granulopoïèse (process dure environ 10 jours & stimulé par la granulocyte/macrophage CSF [GM-CSF])
Cellule précurseur non identifiable : GM
Myéloblaste : commence à produire des granules azurophiles/primaires --> cytoplasme basophile + nucléoles visibles
Promyélocyte : continue la production de granules azurophiles+ nucléoles visibles
Myélocyte éosinophile
Myélocyte basophile
Myélocyte neutrophile
Début de la production de granules spécifiques qui permet la différenciation
Après 3 divisions cellulaires, Métamyélocyte neutrophile : noyau bcp plus dense & production de granules azurophiles diminue
Après 3 divisions cellulaires, Métamyélocyte éosinophile : noyau bcp plus dense & production de granules azurophiles diminue
Après 3 divisions cellulaires, Métamyélocyte basophile : noyau bcp plus dense & production de granules azurophiles diminue
Basophile Granulocyte basophile
Eosinophile Granulocyte éosinophile
Neutrophile (1/3 de granules azurophiles) Granulocyte neutrophile
Les métamyélocytes n'ont pas fini leur lobulation mais peuvent être mobilisés si on produit beaucoup de granulocytes (signe d'une infection)
Monocytopoïèse (process dure environ 2-3 jours & stimulé par la Macrophage CSF [M-CSF] et la Granulocyte/Macrophage CSF [GM-CSF])
Monocyte Monocyte
Les monocytes peuvent ensuite se différencier dans d'autres tisuus du corps (macrophage, cellules dendritiques, cellule de Kupffer)
Lymphopoïèse (process dure environ 2 jours)
Migration dans le thymus puis sélection +/- Lymphocyte T mature Lymphocyte T mature
Après une sélection +/- Lymphocyte B mature Lymphocyte B mature
Pour produire leur récepteur, les lymphocytes vont utiliser un système de recombinaisons génique à partir de plusieurs séquences de son génome (ce qui permet d'obtenir de combinaisons de récepteurs presque infini)
MAIS certaines séquences produites ne fonctionnent pas, le lymphocyte va donc exprimer son récepteur à sa surface (sélection positive) si ne fonctionne pas il refait la recombinaison génique pour produire un autre récepteur et si ne fonctionne toujours pas, il est détruit
- on vérifie que le récepteur ne reconnaît pas récepteurs de son propre organisme (sélection négative) si oui il est détruit.