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Herramientas utilizadas por la genética molecular humana (Métodos de…
Herramientas utilizadas por la genética
molecular humana
Clonación molecular
El objetivo es aislar un gen o cualquier otra secuencia concreta de DNA y amplificarlo en cantidades suficientes que permitan su estudio
Transferencia de una secuencia de DNA de interés a una célula de un microorganismo
A continuación se cultiva el microorganismo para que reproduzca la secuencia de DNA junto con su propio DNA
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
Es una alternativa a la clonación para generar cantidades ilimitadas de una secuencia de interés
Amplificación enzimática de un fragmento de DNA (la diana) localizado entre dos oligonucleótidos «cebadores»
PCR cuantitativa
Técnica cuantitativa para determinar la cantidad de una secuencia de DNA concreta existente en una muestra
Métodos de análisis de los ácidos nucleicos
Transferencia Southern
Permite la detección y el análisis de un subconjunto de fragmentos de DNA de interés existentes en un conjunto aparentemente poco informativo de aproximadamente 1 millón de fragmentos obtenidos por acción de las enzimas de restricción
Análisis con sondas de oligonucleótidos
con especificidad de alelo
Para determinar si en una persona concreta hay o no hay una mutación específica
La sonda de elección a utilizar es un oligonucleótido
sintético debido a que su menor longitud lo hace mucho más
sensible, siendo posible incluso llegar a detectar el cambio de un solo par de bases entre la sonda y la muestra analizada
Transferencia Northern o de RNA
Método estándar para determinar el tamaño y la abundancia de un mRNA derivado de un determinado gen en una muestra de RNA.
Genoteca
Colección de clones cada uno de los cuales contiene un vector al que se ha insertado un fragmento diferente del DNA derivado del DNA o el RNA totales de una célula o tejido
Genotecas genómicas
Contiene fragmentos del DNA genómico generados mediante la digestión parcial con cantidades limitantes de una enzima de restricción que efectúa cortes en los sitios presentes con una frecuencia elevada en el genoma
Genotecas de DNA complementario (cDNA)
DNA complementario (cDNA), que contiene copias de cDNA de la población de mRNA presente en un determinado tejido
Vectores
Molécula de DNA que puede replicarse de
manera autónoma en un huésped y que posteriormente puede ser aislado en forma pura para ser analizado
La ligación de moléculas de DNA de orígenes distintos se denomina tecnología del DNA recombinante
El mas utilizado es el plásmido
Son moléculas naturales de DNA circular de
doble cadena presentes en bacterias y levaduras, y que se mantienen separados y se replican de forma independiente de los cromosomas del propio microorganismo
Hibridación in situ fluorescente
en los cromosomas (FISH)
Hibridar de sondas marcadas con colorantes fluorescentes con el DNA contenido en los cromosomas e inmovilizado en portaobjetos de microscopio para la visualización de aberraciones cromosómicas