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Estudio de la coagulación uploaded image (Los factores de coagulación son…

- - - - Los tejidos contienen el factor hístico el cual acelera la
        coagulación de la sangre.
        
        El factor III se une al factor VII dando
        un complejo enzimático activo que en presencia de iones calcio
        activa al factor X. el factor hístico se encuentra en las membranas
        plasmáticas de las células endoteliales en los vasos sanguíneos.
        
        En términos generales cada factor al ser activado adquiere el
        carácter de enzima y activa a la siguiente (cascada de la
        coagulación). Una vez que el coágulo es retraído, puede separarse y
        el líquido sobrenadante, se llama suero y no contiene los siguientes
        factores: I, V, VIII, XIII.
  - - - El factor XII hidroliza al proactivador del plasminógeno
        transformando la proteína en activador del plasminógeno el cual se
        rompe para producir plasmina.
        
        La calicreía, la plasmina y el factor XIa junto con el CPMA
        rompe más XII produciendo factor XII activado.
        
        La fase de contacto se inicia con la activación del factor XII
        que a su vez con la precalicreína y el CPMA actuanando como
        cofactores activan al factor XI en XIa; esta reacción requiere de
        la presencia de calcio
        
        El factor XI activado actúa sobre el IX y lo activa en
        presencia de factor IV por ruptura del enlace peptídico.
        
        El factor IXa que forma un complejo con el factor VIII
        (FAH), fosfolípidos FP3 más calcio y transforma el factor X en su
        forma activada. El factor VIII es cofactor en esta reacción.
        
        El factor VIII:c y el VIII:vWf ocupa un lugar importante en
        la hemostasia en la vía intrínseca y un papel importante en la
        hemostasia primaria.
  - - - La trombina se genera durante la coagulación por la activación
        de la protrombina en trombina es medida por el factor Xa. Aunque
        la acción del factor Xa sobre la protrombina es específica, su
        velocidad de acción es lenta; sin embargo, ésta es aumentada en
        ciento de veces por la presencia del factor V, fosfolípidos (FP3) y
        calcio.
        
        El factor V es un cofactor que circula en la sangre y es
        producido en el hígado que tiene varias acciones. Su principal acción
        es la degradación del fibrinógeno para convertirlo en fibrina.
        La trombina actúa sobre el fibrinógeno y rompe cuatro
        enlaces arginil succínico produciéndose al principio un par de
        fibrinopéptidos A y un par de fibrinopéptidos B.
        
        En la formación de la fibrina se distinguen tres pasos:
        
        Consiste en la polimerización de la fibrina. Los monómeros se
        pueden polimerizar en forma espontánea, sin embargo, estos
        polímeros son poco estables y pueden ser disueltos por la urea o
        por la plasmina.
        
        Producción de polímero de fibrina estable e
        insoluble y se requiere la participación del factor XIII y los
        iones de calcio. El factor XIII que es activado por la trombina,
        produce enlaces covalentes entre los polímeros inestables
        formados.
        
        La separación de cuatro pequeños péptidos de la molécula de
        fibrinógeno; éstos son fibrinopéptidos A y B. esta separación es
        mediada por la trombina. A la molécula del fibrinógeno se le han
        separado los fibrinopéptidos A y B se les denominan monómeros
        de fibrina.
- - - - Tiempo de Tromboplastina Parcial y Tiempo de Tromboplastina Parcial Activada.
        
        Miden la actividad de
        coagulación de la vía intrínseca. tromboplastinas se agregan al plasma y se mide el tiempo de
        coagulación después de la adición del calcio. Ambos estudios son
        modificaciones al tiempo de recalcificación del plasma.
        
        En el TTP la adición de la tromboplastina prevé una máxima
        actividad plasmática, sin embargo, se deben tener los mismos
        cuidados para evitar activación del sistema de contacto.
        
        El tipo de anticoagulante influye también en los resultados,
        cuando se usa oxalato, los tiempos de coagulación son más largos
        que cuando se usa citrato.
        
        Poco sensible para
        detectar deficiencias menores en los factores de coagulación ya
        que mide la actividad total de la vía intrínseca y esto se puede
        enmascarar por elevaciones concomitantes en otros factores de la
        coagulación.
        
        Es útil
        en el estudio de los factores de contacto, los factores VIII y IX y
        en la identificación de anticoagulantes circulantes; es el estudio de
        elección en el control de tratamiento con heparina.
  - - - Ponga 4.5 mL de sangre a 0.5 mL de solución anticoagulante y
        mezcle. Pueden usarse tubos vacutainer, si el tubo usado es el
        segundo extraído.
        
        Centrifugue la sangre inmediatamente por 10 minutos a 3,000
        rpm, retire el plasma, refrigérelo hasta su uso. No debe
        trabajarse después de dos horas.
        
        Ponga una alícuota de plasma normal en un baño a 37 °C a
        calentar y hacer lo mismo con el cloruro de calcio.
        
        Pipetear 0.1 mL de reactivo de tromboplastina parcial activada
        en cuatro tubos de vidrio, déjelos calentar a 37 °C por tres
        minutos (verificar tiempos de incubación dependiendo de la
        marca del reactivo).
        
        Pipetear 0.1 mL de plasma normal en uno de los tubos que
        contiene el reactivo y mezcle suavemente. Incube por dos
        minutos.
        
        Añada a la mezcla anterior 0.1 mL de cloruro de calcio
        precalentado a 37ªC y eche a andar el cronómetro.
        
        Incline el tubo suavemente, no más de una vez por segundo.
        Detenga el cronometro cuando se empiecen a formar hebras de
        fibrina. Repita la prueba con el segundo tubo.
        
        Pruebe el plasma del paciente de la misma manera que el plasma
        normal. haga siempre determinaciones por duplicado.
        
        Valores de decisión clínica: Manual
        menor de 40 seg plasma citratado. Menor de 45 con plasma
        oxalatado.
  - - - Generalmente se utilizan volúmenes iguales de los plasma
        enfermaos y testigo, sin embargo, una mezcla de 0.1 mL volumen de
        plasma normal con 0.9 mL volúmenes de plasma enfermo, puede
        identificar un anticoagulante.
        Si la mezcla de los plasmas indica deficiencia, se deben hacer
        sustituciones con plasma absorto y con suero normal envejecido
        para identificar el factor deficiente. La identificación final se hará
        con plasmas deficientes en el factor específico.
    - - Plasma adsorto, PNA (contiene factores: I, V, VIII, XI, XII).
        Tomar muestra de sangre: una parte de anticoagulante de
        oxalato de calcio 0.1 M y nueve partes de sangre.
         Centrifugue la muestra por cinco minutos a 2000 rpm. Separe el
        plasma lo más pronto posible.
         En un tubo de vidrio, coloque 1 mL del plasma, agregue 100 mg de
        sulfato de bario, mezclando muy bien con una varilla de vidrio.
         Deje reposar por dos minutos, para obtener una adsorción
        completa.
         Centrifugue 10 minutos a 2000 rpm.
         Separe el sobrenadante.
         Practicar un Tiempo de Protrombina, si el resultado es de cinco
        minutos o más, esto indica que el plasma ha sido adsorbido
        correctamente.
      - Suero envejecido, SNE (contiene factores: IX, X, XI y XII).
         En un tubo de vidrio sin anticoagulante ni aditivos, tomar muestra
        de sangre sin anticoagulante (2 mL).
         Dejar coagular (mínimo 15 minutos).
         Separar el suero a 2000 rpm 10 minutos.
         Almacenar a 4°C por tres días.
- - - - Reactivos.
         Plasma absorto (contiene factores: I y V).
         Suero envejecido (contiene factores VII y X).
         Los reactivos restantes son los mismos que se usan para el TP.
- - - - Reactivos.
         Solución de citrato de sodio al 3.8 %.
         Solución salina.
         Cloruro de calcio 0.025 M o 0.1 M.
         Solución de trombina.
         Solución regular de trombina-calcio.
         La trombina debe ser diluida en solución salina para dar una
        concentración de 50 U/mL entonces diluiría con cloruro de calcio
        0.1 M para que al probarla con un plasma normal nos dé un tiempo de 8 a 9 segundos. Una concentración de 7 U/mL es
        satisfactoria.
         Solución especial de trombina-calcio se emplea para evaluar
        plasma de pacientes heparinizados.
         Plasma normal, fresco o comercial de concentración conocida.
    - - Si el tiempo de trombina del paciente es más largo que el del
        control, sugiere: una marcada deficiencia del factor I
        (Fibrinógeno),
      - Si la mezcla v/v dl plasma normal y plasma problema da un
        tiempo de coagulación que se aproxima al del plasma control, el
        diagnóstico es una deficiencia o anormalidad estructural.
      - Si la disparidad entre el tiempo de trombina del paciente y del
        control normal es mucho más aparente con la solución pura de
        trombina-calcio, esto sugiere definitivamente una anormalidad
        estructural en las moléculas de fibrinógeno.
      - Si el tiempo de trombina está normal con ambos reactivos
        (trombina y trombina – calcio), pero los coágulos son de pobre
        calidad, entonces sugiere una deficiencia de factor XIII.
      - El tiempo de coagulación usando la solución especial trombina-
        calcio debe usarse en el control de terapia con heparina. Si se
        usa este método es recomendable que se prepare una curva
        control de heparina.
  - - - Claus
        
        Reactivos.
         Citrato de sodio al 3.8 % u oxalato de sodio 0.1 M.
         Solución salina.
         Solución trombina bovina, dando una concentración final de 100
        U/mL.
         Plasma fresco o comercial de concentración conocida de
        fibrinógeno.
         Papel log-log de dos ciclos.
         Kit para determinación de fibrinógeno (Dade y Ortho).
         Fibrinómetro.
        
        La sangre debe colectarse en jeringa o vacutainer, combinando
        4.5 mL de sangre en 0.5 mL de anticoagulante. Mezcle
        perfectamente.
        
        Centrifugue a 3,000 rpm por 10 minutos y separe el plasma,
        refrigérelo hasta su uso.
        
        Usando la solución salina prepare diluciones 1:5, 1:15 y 1:40 del
        estándar de plasma de concentración conocida de fibrinógeno.
        
        determine el tiempo de coagulación de cada dilución por
        duplicado, incubando 0.2 mL de plasma diluido en un baño de agua
        a 37 °C por tres minutos antes de añadir 0.1 mL de solución de
        trombina que estará a temperatura ambiente.
        
        Promedie el tiempo de coagulación de cada dilución y grafique los
        puntos sobre el papel log-log de dos ciclos. El tiempo de
        coagulación (en segundos) debe graficarse sobre las ordenadas y
        la concentración de fibrinógeno sobre las abscisas.
        
        Haga una dilución de 1:10 de la muestra del paciente con solución
        salina y pruébela por duplicado como se hizo con las diluciones
        del plasma estándar. Niveles muy altos requieren una dilución de
        la prueba de 1:20 y valores muy bajos de 1:5 o 1:2.
        
        Ambos controles, normal y anormal de fibrinógeno debe ser
        probados de la misma manera que el plasma del paciente, tales
        plasmas son hechos para tener niveles de fibrinógeno dentro del
        rango normal.
        
        Valores de decisión clínica: 200 a 400
        mg/dL, con un valor medio de 300 mg/dL.
      - Cuantificación de fibrinógeno con el reactivo de Parfentjev
        
        El reactivo de Parfentjev precipita el
        fibrinógeno pero deja en solución a todas las demás proteínas. El
        grado de turbidez está en relación con la concentración del
        fibrinógeno. Esta no es una prueba precisa, pero puede encontrar
        cambios significativos en la concentración de la proteína.
        
        Reactivos.
         Citrato de sodio (0.1M).
         Solución de cloruro de sodio (0.58%).
        Reactivo de parfentjev.
         Sulfato de amonio (NH 4 ) 2 SO 4. 133.33 g
         Cloruro de sodio (NaCl) 10.00 g
         Merthilate 0.25 g
         Agua destilada 1000 mL
        Ajustar pH 7.0 con hidróxido de sodio NaOH 10 M
        
        Procedimiento.
        
        Tomar la muestra de sangre con jeringa de plástico mezclando
        4.5 mL de sangre en 0.5 mL de anticoagulante.
        
        Centrifugue la sangre a 3,000 rpm por 10 minutos y separe el
        plasma.
        
        Marque dos cubetas de espectrofotómetro, una como B (blanco)
        y la otra como P (problema).
        
        Ponga en la cubeta B 1.0 ml de plasma y 9.0 mL de solución de
        cloruro de sodio (pueden utilizarse cantidades a la mitad).
        
        En la cubeta marcada como P, coloque 1.0 mL del plasma y 9.0 mL
        del reactivo de Parfentjev.
        
        Mezcle por inversión lenta, deje reposar exactamente tres
        minutos y lea la densidad óptica.
        
        La concentración de fibrinógeno se obtiene por la siguiente
        ecuación:
        
        Valores de decisión clínica (Valores de referencia): Las cifras
        normales varían de 200 a 400 mg/dL.