Please enable JavaScript.

Coggle requires JavaScript to display documents.

ENZIMAS (Enzimas de significado clínico. (Aldolasa uploaded image (Tiene…

- - - - Estas enzimas catalizan la electrólisis de gran variedad de fosfomonoésteres (hidrolasa).
        
        Se encuentra ampliamente distribuida en los tejidos humanos. Su fuente de importancia clínica incluye hígado, hueso, placenta, bazo y riñón.
      - Valores de decisión clínica
        
        El rango de referencia depende en gran medida del sexo y la edad.
        
        El rango de referencia en adultos de fosfatasa alcalina total es de 35 a 100 U/L. los rangos pediátricos y en adolescentes en general son el doble o triple de los de adulto
        
        En la segunda década y hasta los 50 años los niveles son similares en hombres y mujeres. Después de la menopausia, la isoenzima ósea aumenta ligeramente en mujeres. En el embarazo los valores aumentan de dos a tres veces, principalmente debido a la isoenzima placentaria.
        
        Los niveles de ALP aumentan en un 10 % en un IMC alto, los antiepilépticos aumentan los niveles de ALP por aumento de la isoenzima hepática. El tabaquismo, también aumenta los niveles de ALP.
        Los niveles de ALP disminuyen en los pacientes con transfusiones sanguíneas.
      - Recolección y manejo de las muestras
        
        Se requiere ayuno para la toma de la muestra. Se prefiere el suero.
        La hemólisis leve es aceptable
        
        El análisis debe realizarse lo antes posible, ya que la actividad de la fosfatasa alcalina se incrementa aproximadamente de 5 a 10% al reposar a temperatura ambiente
        
        A 4 °C las muestras se mantienen relativamente estables hasta una semana
      - Procedimientos analíticos
        
        Se utiliza p-nitrofenilfosfato (pNPP) como sustrato a pH alcalino, Bower y McComb, es una técnica de vigilancia continua que utiliza el coeficiente de absortividad molar del p-nitrofenol a 405 nm para calcular la actividad de la fosfatasa alcalina.
        
        La pNPP es incolora, se hidroliza en presencia de fosfatasa alcalina y produce color amarillo. Como la ALP se desnaturaliza lentamente a 37 °C, se recomienda que la reacción se efectúe de 25 a 30 °C.
        
        El EDTA, citrato y oxalato disminuyen la actividad de la ALP, por lo que no debe tomarse la muestra con tubos con anticoagulantes quelantes.
      - Isoenzimas
        
        La separación de isoenzimas de la fosfatasa alcalina en suero se basa en las propiedades químicas de diversas formas isoenzimáticas.
        
        Electroforesis
        
        Es el método más utilizado, la electroforesis con: geles de acetato de celulosa, agarosa y poliacrilamida.
        
        La migración se basa sólo en una diferencia de carga de las isoenzimas.
        
        Para diferenciar a estas dos isoenzimas se añade neuraminida
        
        Posteriormente se hace el análisis de densitometría.
        
        Inmunoquímicos
        
        Se hacen reaccionar antisueros de las formas placentaria, hepática e intestinal con el suero que contienen las isoenzimas de la fosfatasa alcalina.
        
        Inactivación por calor.
        
        La isoenzima más estable al calor es la placentaria, seguida de la hepática y la más débil la ósea
        
        Se deben utilizar estándares de concentración conocida y un estricto control de la temperatura y el tiempo.
        
        Inmunoensayos
        
        Comercialmente disponibles para la isoenzima de hueso y placentaria.
        
        El inmunoensayo para la isoenzima ósea presenta cierta actividad cruzada con la isoenzima hepática y el de la isoenzima placentaria presenta una reactividad cruzada variable con las isoenzimas de células germinales.
        
        Inhibición
        
        La L-fenilalanina inhibe la fosfatasa alcalina placentaria e intestinal, dejando la fosfatasa alcalina hepática y ósea.
      - Significado clínico
        
        Se relaciona principalmente con la detección de enfermedades óseas y hepáticas.
        
        Útil para el diagnóstico diferencial de enfermedades hepáticas. Se eleva en más en los casos con afecciones de los conductos biliares que en las que producen principalmente lesión hepatocelular.
        
        Es de ayuda separar estas fracciones isoenzimáticas para mayor precisión diagnóstica.
        
        Significado (Elevaciones)
        
        Malabsorción (Psicosis)
        
        Levemente elevada
        
        Fracturas óseas
        
        Levemente elevada
        
        Osteomalacia y raquitismo
        
        1 a 3 veces lo normal
        
        Ictericia obstructiva extrahepática
        
        Hasta 5 veces lo normal
        
        Hepatitis infecciosa
        
        Levemente elevada
        
        Colestasis intrahepática
        
        2 a 3 veces lo normal
        
        Cáncer o tumor hepático
        
        5 a 10 veces lo normal
        
        Cirrosis alcohólica
        
        1,5 a 3 veces lo normal
        
        Tumores óseos
        
        Elevaciones moderadas
        
        Enfermedad de Paget
        
        Elevaciones marcadas
        
        Hiperparatiroidismo
        
        Marcadas elevaciones si hay deficiencia de calcio; de lo contrario son variables
    - - Las dos más importantes son la aminotransferasa aspártica (AST; EC 2.6.1.1) y la alaninaminotransferasa (ALT; EC 2.6.1.2).
        
        AST (TGO)
        
        Cataliza la transferencia de un grupo amino de un L-glutamato o L-aspartato al alfa oxiglutarato u oxalacetato.
        
        La AST se concentra mayormente en el citoplasma del hígado, músculo del miocardio y esquelético, y en el riñón. Tiene menor actividad en el páncreas, bazo, pulmones y eritrocitos.
        
        ALT (TGP)
        
        La ALT su mayor concentración es en el citoplasma del tejido hepático.
        
        La ALT cataliza la transferencia de un grupo amino de un L-glutamato o L-alanina al alfa-cetoglutarato o piruvato.
      - La coenzima piridoxal-5’-fosfato (P-5’-P) actúa como cofactor necesario tanto para la AST como para la ALT.
      - Valores de decisión clínica (Valores de referencia):
        
        Los valores de referencia dependen de la edad, el sexo y el estado hormonal en mujeres. A 37 °C el rango para adultos de AST es 5 a 34 U/L y para ALT a sube hasta 50 U/L
        
        Hasta los 15 años aproximadamente los niveles de ALT son más altos que los de AST, después los niveles de AST son más altos.
        
        Algunos individuos después de los 60 años el patrón de valores vuelven a invertirse.
      - Recolección y manejo de las muestras.
        
        Es más conveniente utilizar suero. Las muestras hemolizadas son inaceptables.
        
        La lipemia interfiere con algunos métodos colorimétricos. El exceso de bilirrubinas interfiere en ciertos análisis.
        
        Se conservan con una pérdida mínima de su actividad de 2 a 8 °C por tres semanas.
        
        Si se congela el tiempo de conservación no es de más de tres días.
        
        El ejercicio intenso en el hombre eleva los niveles de AST hasta tres veces y a la ALT aumenta hasta un 50 %.
        
        El fallo renal produce disminución de los niveles de ALT y en menor medida de AST.
      - Procedimientos analíticos
        
        La vigilancia continua en el ultravioleta.
        
        Reacciones acopladas. Técnica fluorescente enzimática.
        
        Determinación colorimética de punto final.
      - Significado clínico (elevadas)
        
        Miocarditis
        
        AST
        
        4 a 5 veces lo normal.
        
        ALT
        
        Normal o aumento leve
        
        Insuficiencia cardíaca con congestión hepática
        
        AST
        
        10 veces lo normal.
        
        ALT
        
        5 a 10 veces lo normal.
        
        Pericarditis
        
        AST
        
        4 a 5 veces lo normal
        
        ALT
        
        Normal o aumento leve
        
        Hepatitis viral
        
        AST
        
        10-100 veces lo normal.
        
        ALT
        
        10-100 veces lo normal.
        
        Insuficiencia cardíaca congestiva
        
        AST
        
        4 a 5 veces lo normal.
        
        ALT
        
        Hasta 20 veces lo normal
        
        Infarto del miocardio
        
        AST
        
        4 a 5 veces lo normal; > 10 a 15 veces de lo normal en infartos fatales
        
        ALT
        
        Normal o aumento leve en infartos sin complicaciones.
        
        Infarto al miocardio
        
        AST
        
        4 a 5 veces lo normal; > 10 a 15 veces de lo normal en infartos fatales
        
        ALT
        
        Normal o aumento leve en infartos sin complicaciones
        
        Hepatitis tóxica
        
        AST
        
        Hasta 20 veces lo normal.
        
        ALT
        
        Hasta 20 veces lo normal.
        
        Síndrome de Reye
        
        AST
        
        3 a 5 veces lo normal.
        
        ALT
        
        3 a 5 veces lo normal.
        
        Mononucleosis infecciosa
        
        AST
        
        Hasta 20 veces lo normal.
        
        ALT
        
        Hasta 20 veces lo normal.
        
        Ictericia obstructiva, colangitis
        
        AST
        
        Hasta 5 veces lo normal
        
        ALT
        
        Hasta 5 veces lo normal
        
        Cirrosis
        
        AST
        
        Aumentos variables.
        
        ALT
        
        Aumentos variables.
        
        Distrofias musculates
        
        AST
        
        Hasta 8 veces lo normal.
        
        ALT
        
        Hasta 8 veces lo normal.
        
        Gangrena
        
        AST
        
        2-5 veces lo normal.
        
        ALT
        
        Normal o aumento leve
        
        Lesiones del músculo esquelético
        
        AST
        
        2-5 veces lo normal.
        
        ALT
        
        Normal o aumento leve
        
        Embolia pulmonar
        
        AST
        
        Hasta 3 veces lo normal.
        
        ALT
        
        Generalmente no se afecta.
        
        Uremia
        
        AST
        
        Supresión de la actividad en algunos pacientes
        
        ALT
        
        No es aplicable
        
        Deficiencia de Vitamina B6
        
        AST
        
        bajo normal hasta por debajo de la normalidad; se corrige con algunos métodos
        
        ALT
        
        bajo normal hasta por debajo de la normalidad; se corrige con algunos métodos
    - - La fosfatasa ácida (ACP) es un grupo heterogéneo inespecífico de fosfatasa que pertenece a la clase de las enzimas hidrolasas.
        
        Hay varias isoenzimas de ACP con especificidad por algún tejido. Las isoenzimas se pueden fraccionar por bandas en la electroforesis.
        
        La banda 5 se encuentra en los osteoclastos: la banda 3 en el plasma y es la forma más abundante, proviene de plaquetas, eritrocitos y monocitos; las bandas 2 y 4 se origina en los granulocitos y la banda 1 es de la próstata
        
        La actividad de la ACP prostática en suero es prácticamente despreciable; prácticamente toda la ACP se encuentra en los eritrocitos y plaquetas.
        
        Valores de decisión clínica
        
        Dependen de la edad, sexo y estado hormonal (en mujeres). Son altos en niños
        
        En los últimos años de la adolescencia disminuyen a los valores de los adultos, que son constantes en ambos sexos hasta aproximadamente a los 80 años.
        
        Para fosfatasa ácida total es de 0.5 a 1.0 U/L (enzimática) y para PAP (fosfatasa ácida prostática) es < 2.4 ng/mL.
        
        Recolección y manejo de las muestras
        
        Se utiliza suero. Es necesario separar rápidamente el suero y acidificar a un pH inferior a 6 con ácido acético o una tableta estabilizadora; estable hasta dos días en refrigeración si el suero se acidifica previamente.
        
        Procedimientos analíticos
        
        se mide a través de su capacidad de escindir grupos fosfatos a pH ácido. Lo más habitual es utilizar p-nitrofenilfosfato (pNPP) como sustrato a pH ácido, es una técnica de vigilancia continua
        
        fenol a 405 nm para calcular la actividad de la fosfatasa ácida. Esta reacción puede medirse antes y después de añadir tartrato (0.02 mol/L), que inhibe la isoenzima prostática. Tras la inhibición con tartrato se resta la actividad de la ACP de la actividad total de ACP sin inhibición. La actividad restante representa la PAP:
        
        ACP total - ACP tras la inhibición con tartrato= PAP
        
        Medición de PAP: sustrato diferencial, inhibidores químicos, ensayos fluorimétricos y técnicas inmunológicas como RIA, DELFIA, ELISA y contrainmunoelectroforesis.
        
        Significado clínico
        
        La principal causa de niveles altos de ACP es la enfermedad prostática con el desarrollo de PSA.
        
        La determinación de PSA hace posible la detección del cáncer en las primeras etapas sin metástasis.
        
        Las afecciones que se caracterizan por aumento del recambio óseo en las que participan estas células producen aumento de los niveles de ACP.
        
        Los niveles de ACP también se elevan por afecciones no prostáticas, una de ellas la enfermedad de Gaucher (un tipo de lipidosis que se debe a la deficiencia de enzima glucocerebrosidasa, acumulando cerebrósidos en la células del sistema reticuloendotelial que se denominan células de Gaucher.
    - - La creatincinasa (CK. EC 2.7.3.2) es una enzima del citoplasma y la mitocondria que cataliza tanto la formación de ATP como la fosforilación reversible de la creatina, con el ATP como grupo donador de fosfato.
        
        La CK requiere de activadores metálicos, particularmente el Mg2+
        
        La CK está implicada en el almacenamiento de energía en los tejidos, principalmente en el músculo.
      - La CK existe como un dímero que consta de dos subunidades; la subunidad B (cerebro) y la M (músculo), se forman postranslocaciones para formar tres isoenzimas que se designan CK-BB (CK-1), CK-MB (CK-2) Y CK-MM (CK-3)
        
        La separación y análisis de las isoenzimas tiene mayor significado clínico que la determinación de la CK total.
        
        La CK-MM predomina en el músculo. Se eleva en diversas afecciones musculares.
        
        La CK-MB (CK-MC) se limita casi exclusivamente al tejido muscular cardiaco.
        
        La CK-BB (CK-CC) se encuentra principalmente en el cerebro y en el sistema nervioso central y en pequeñas cantidades en diversos tejidos, pulmón, próstata, útero y aparato digestivo.
      - Valores de decisión clínica
        
        Los rangos para CK en suero se ven afectados por la cantidad de masa muscular, la edad, el sexo, la raza y la actividad física del individuo.
        
        En general CK total:
        Varones: 15 – 160 U/L (37 °C).
        Mujeres: 15 – 130 U/L (37 °C).
        RN: 2 ó 3 veces superiores a los de los adultos.
        
        En electroforesis para las isoenzimas:
        CK-BB: ausente.
        CK-MB: < 6% de la CK total.
        CK-MM: 94-96 %.
        En ensayo inmunológico o métodos inmunoquímicos:
        CK-MB: 0-10 U/L.
        
        Ejercicio aeróbico a niveles de intensidad normal presentan valores más bajos; ejercicio intenso de corta duración aumentan los niveles de 10 a 100 veces.
        
        Aumento en cualquier tipo de daño muscular; disminución en pacientes hospitalizados
      - Recolección y manejo de las muestras
        
        Se utiliza suero, El suero de almacenarse a oscuras a 4 °C durante siete días o a -20 °C por un mes cuando el ensayo se realiza con un activador sulfhidrilo.
        
        Se deben considerar las distintas tensiones físicas, como ejercicio, como variables preanalíticas al interpretar los resultados de CK para el diagnóstico de infarto agudo al miocardio.
      - Procedimientos analíticos
        
        Cromatografía de cambio iónico
        
        Es el método de referencia para cuantificar CK-MM.
        Ofrece mayor precisión y sensibilidad que la electroforesis
        
        Inmunoinhibición
        
        Las subunidades M de la CK-MM y CK-MB se inhiben al entrar en contacto con los anticuerpos anti-M. La actividad B residual se mide y después de multiplica por dos para calcular la CK-MB. En este método se asume que no hay CK-BB.
        
        Electroforesis
        
        Es el método más empleado, rápido, con buena sensibilidad. Las bandas CK se separan aplicando fuerza electromotriz a pH de 8.6
        
        Para determinar el porcentaje relativo de la actividad de las bandas en los geles se analizan con un densitómetro. Se determina la cantidad total de CK.
        
        RIA
        
        Es muy sensible y específico para la determinación de CK-MB
        
        Ck total
        
        Se mide normalmente por medio de una reacción acoplada. El método de referencia es el de Oliver y Rosalki, un análisis cinético en la que se emplea una secuencia de reacción “inversa”:
      - Significado clínico
        
        Afecciones musculares neurológicas
        
        Ck total
        
        La CK es normal
        
        Isoenzimas Ck
        
        No se observa incremento de las isoenzimas
        
        Hipotermia maligna
        
        Ck total
        
        Incremento notable
        
        Isoenzimas Ck
        
        Debido a CK-MM
        
        Distrofia muscular (Duchenne y Becker)
        
        Ck total
        
        Sintomáticos tienen valores 50 más veces el límite superior; los portadores tienen valores de 3 a 6 veces el límite superior
        
        Isoenzimas Ck
        
        Debido a CK-MM y CK-MB
        
        Traumatismos musculares
        
        Ck total
        
        Puede elevarse hasta > 200 veces lo normal en casos graves
        
        Isoenzimas Ck
        
        Debido a CK-MM
        
        Pruebas de estrés en pacientes con sospecha de enfermedad de la arteria coronaria
        
        Ck total
        
        Despreciables
        
        Isoenzimas Ck
        
        La CK-MB no varía
        
        Síndrome de Reye
        
        Ck total
        
        Hasta 70 veces lo normal
        
        Isoenzimas Ck
        
        Debido a CK-MM
        
        Cateterismo cardíaco arteriografía coronario
        
        Ck total
        
        Se observan incrementos moderados
        
        Isoenzimas Ck
        
        La CK-MB por lo general no varía.
        
        Accidente o enfermedad cerebrovascular
        
        Ck total
        
        La elevación se correlaciona con la extensión de la lesión
        
        Isoenzimas Ck
        
        La CK-BB aumenta
        
        Contrachoque eléctrico terapéutico
        
        Ck total
        
        Hasta 6 veces lo normal en aproximadamente en el 50% de los pacientes
        
        Isoenzimas Ck
        
        La CK-MB es normal
        
        Isquemia cerebral
        
        Ck total
        
        La elevación se correlaciona con la extensión de la lesión
        
        Isoenzimas Ck
        
        La CK-BB aumenta
        
        Miocarditis
        
        Ck total
        
        Puede estar notablemente incrementada
        
        Isoenzimas Ck
        
        Se asocia con incremento relativo de CK-MB
        
        Reducción de la masa muscular
        
        Ck total
        
        Variable
        
        Isoenzimas Ck
        
        Debido a CK-MM
        
        Infarto al miocardio
        
        Ck total
        
        CK aparece de 6 a 15 horas tras el infarto al miocardio; alcanza su máximo a las 24 horas; regresa a su normalidad en 1 a 4 días. Su actividad es de 7 a 12 veces lo normal.
        
        Isoenzimas Ck
        
        En su mayoría se eleva CK-MM y CK-MB. La CK-MB se eleva de 3 a 15 horas tras el infarto del miocardio; alcanza un máximo a las 12 horas; regresa a su normalidad en 2 a 3 días.
        
        Reposo restringido en cama
        
        Ck total
        
        Variable
        
        Isoenzimas Ck
        
        Debido a CK-MM
        
        Metástasis
        
        Ck total
        
        Variable
        
        Isoenzimas Ck
        
        Debido a CK-MM
        
        Tratamiento con esteroides
        
        Ck total
        
        Variable (en algunos individuos)
        
        Isoenzimas Ck
        
        Debido a CK-MM
        
        Hipertiroidismo
        
        Ck total
        
        Bajos o valores limitantes Ns
        
        Isoenzimas Ck
        
        Debido principalmente a CK-MM
  - - - La elevación LD en suero se considera inespecífica para cualquier enfermedad o afección.
      - La combinación de estas subunidades producen las siguientes isoenzimas:
        LD1: (HHHH).
        LD2: (HHMM).
        LD3: (MMMM).
        LD4: (HHHM).
        LD5: (HMMM).
    - - Los valores son mayores en los recién nacidos y lactantes
        
        Los rangos de referencia de isoenzimas LD se indican como porcentajes de la LD total:
        LD1: 22 – 36 %
        LD2: 35 – 46 %
        LD3: 13 – 26 %
        LD4: 3 – 10 %
        LD5: 2 – 9 %
    - - La elección es suero. Los tubos deben estar cerrados en posición vertical con el tapón hacia arriba. Las muestras hemolizadas deben rechazarse.
        
        Los laboratorios recomiendan que se conserven a temperatura ambiente cuando se va efectuar el análisis de isoenzimas LD.No se recomienda muestras refrigeradas o congeladas.
    - - La actividad de la LD se puede medir utilizando tanto la reacción directa (lactato a piruvato) la más usada por la mayoría de los laboratorios, como la inversa (piruvato a lactato).
        
        Cromatografía de intercambio iónico
        
        Se utilizan minicolumnas de intercambio iónico. Se basa en la separación de las fracciones de las isoenzimas utilizando una minicolumna de resina de intercambio iónico que contiene dietilaminoetilo
        
        Inmunoprecipitación
        
        Solo mide LD1, es una reacción de precipitación en fase sólida de dobles anticuerpos. Tiene una especificidad diagnóstica del 94% para infarto agudo del miocardio.
        
        Estabilidad al calor
        
        Es el menos preciso. Después de exponer el suero a 60 °C por 30 minutos, la LD1 no es afectada y la LD5 se destruye totalmente.
        
        Movilidad electroforética
        
        Es el método que más se emplea. La separación se realiza en gel de agarosa o acetato de celulosa, analizándose por densitometría.
        
        Se aplica al gel una mezcla de amortiguador con L-lactato y NAD+, lo que permite su detección de la cantidad de fluorescencia que genera el NADH.
    - - Distrofia muscular
        
        Hasta 10 veces lo normal, especialmente LD5
      - Insuficiencia cardiaca congestiva, miocarditis, choque o colapso circulatorio
        
        La LD aumenta hasta 5 veces lo norma
      - Traumatismos musculares debido al ejercicio físico
        
        Incremento variable, especialmente la LD5 de acuerdo con la cantidad de traumatismos.
      - Anemia megaloblástica
        
        Aumentos en la LD total > 5 por lo normal.
        Aumentan las isoenzimas LD1 y LD2
      - Cáncer, metástasis
        
        10 veces lo normal
      - Infarto al miocardio
        
        Hasta 10 veces lo normal.
        Se observa aumento de la LD en 8 a 12 horas después del inicio del dolor. La actividad máxima se produce de 18 a 24 horas.
      - Cirrosis e ictericia obstructiva
        
        2 veces lo normal.
        Predomina LD5
      - Hepatitis viral y mononucleosis infecciosa
        
        Hasta 5 veces lo normal.
        Predomina LD5
  - - - La AMS actúa sobre los enlaces glucosídicos α, 1-4 dando productos de degradación que son la glucosa, maltosa y cadenas intermedias, llamadas dextrinas. Por lo tanto, la AMS es una enzima importante en la digestión fisiológica de almidones.
        La AMS requiere Ca2+ y Cl- para su activación.
    - - Debe usarse suero o plasma recién extraído.
      - El suero o el plasma separado no deben permanecer más de 8 horas entre 15°C y 30°C
      - Si debe almacenar más de 48 horas se debe congelar a -15°C y -20°C. Las muestras se deben descongelar solamente una vez.
      - Los pacientes con pancreatitis aguda con hiperlipemia presentan valores de AMS normales.
      - La administración de medicamentos para aliviar el dolor, morfina y otros opiáceos, dan valores de AMS falsamente elevados.
    - - Su determinación se lleva a cabo por un método enzimático, reacciones acopladas.
    - - Depende del método.
        Suero: 27 a 130 U/L
        Orina: 1 a 15 U/h.
    - - Diagnóstico y tratamiento de pancreatitis
  - - - Los tubos de sangre se deben mantener siempre cerrados en posición vertical con el tapón hacia arriba. El suero se debe separar de las células lo más pronto posible.
      - El suero plasma separado no deben permanecer más de 4 horas entre 15°C y 30°C. Si los ensayos no se realizan dentro de las 4 horas, el suero se debe almacenar entre 2°C y 8°C.
    - - Se utiliza la metodología de Panteghini para determinar la actividad de la lipasa pancreática en suero. El sistema LX controla la velocidad de formación de metilresorufina que se forma espontáneamente a partir de dos reacciones emparejadas que utilizan un éster de (6'-metilresorufina) del ácido 1,2-O-dilauril-rac-glicero-3-glutárico como sustrato.
      - La velocidad de formación de color medida a 560 nm es directamente proporcional a la actividad de la lipasa pancreática.
    - - Según el método empleado: 22 a 51 U/L, 0 a 1.0 U/mL.
    - - Se utilizan principalmente en el diagnóstico y tratamiento de trastornos pancreáticos. En la pancreatitis aguda aumentan con rapidez los niveles de AMS y LPS, los incrementos de AMS persisten por dos a tres días y los LPS persisten cinco días.
  - - - La función fisiológica de la GGT parece ser su intervención en la síntesis de péptido y proteína, la regulación de las concentraciones de glutatión tisular y el transporte de aminoácidos por las membranas celulares.
    - - El suero o el plasma se deben separar de las células lo más pronto posible.
      - El suero plasma separado no debe permanecer más de 4 horas entre 15°C y 30°C. Si los ensayos no se realizan dentro de las 4 horas, el suero debe conservarse a 4 °C por una semana.
    - - La actividad de la γ-glutamil transferasa se mide mediante un método cinético enzimático.
        
        En la reacción, la γ-glutamil transferasa cataliza la transferencia de un grupo gamma-glutamil desde el sustrato incoloro gamma-glutamil-p-nitroanilina, al aceptor, glicilglicina, y genera un producto coloreado, la p-nitroanilina.
    - - Dependen de la edad, del sexo y la reza.
        Varones: 6 a 45 U/L (37 °C).
        Mujeres: 5 a 30 U/L (37 °C).
        En las mujeres los valores son menores debido a la supresión de la actividad enzimática por las hormonas femeninas.
    - - La GGT aumenta en casi todos los trastornos hepatobiliares, las concentraciones más altas se encuentran en la obstrucción biliar.
      - Los niveles de GGT se utilizan en el diagnóstico y tratamiento de enfermedades hepáticas tales como cirrosis alcohólica y tumores hepáticos primarios y secundarios.
  - - - Se encuentra actividad de la aldolasa en todas las células del organismo pero es superior en los tejidos cuya vía glucolítica aporta gran parte de la energía que requiere el organismo.
        
        Principalmente, el músculo esquelético, hígado y cerebro.
    - - ALS B fracción que predomina el hígado
      - ALS C Se localiza en cerebro
      - ALS A Predomina en músculo
    - - Se mide por un procedimiento enzimático acoplado midiéndose los cambios de absorbancia del NADH a 340 nm
    - - Suero, se debe separar con rapidez el suero de las células
        
        Se conserva a 4ºC por 5 dias y se debe evitar la hemólisis porque da resultados falsos elevados
    - - Hombres: 2.61 a 5.71 U/L (37°C).
        Mujeres: 1.98 a 5.54 U/L (37°C)
    - - ASL B. constituye un marcador adecuado en las afecciones hepáticas benignas y malignas. Hepatitis aguda y crónica.
      - La utilidad clínica se relaciona principalmente con afecciones del músculo esquelético.
  - - - Su función biológica específica no se conoce, se cree que participa en la producción de adenosina extracelular, la absorción de nutrientes y la proliferación celular.
    - - Es procedimiento más usado mide los productos de reacción adenosina y fosfato inorgánico
    - - El suero puede almacenarse a refrigeración por tres días con una pérdida despreciable de la actividad enzimática.
    - - 2.0 a 9.5 U/L.
    - - Se eleva en las afecciones hepatobiliares paralela a la ALP y GGT. También se eleva en la artritis reumatoide y carcinoma ovárico.
  - - - Este último es necesario para reducir al glutatión, una sustancia importante que protege a la hemoglobina de la desnaturalización oxidativa.
      - Se encuentra en los eritrocitos, corteza suprarrenal, ganglios linfáticos, timo y bazo. Su actividad es mayor en los eritrocitos inmaduros y se reduce al madurar las células. Actividad mínima en suero normal.
    - - Se mide añadiendo un hemolizado de eritrocitos a la mezcla de reacción que contiene glucosa-6-fosfato. El NADPH que se genera se determina por espectrofotometría a 340 nm.
    - - La deficiencia de G-6-PD es una afección de tipo genético que ocasiona un suministro inadecuado de NADPH y, en por lo tanto niveles inadecuados de glutation reducido.
    - - Suero: 0 a 0.18 U/L.
        Eritrocitos: 0.117 a 0.143 U/109 células.
        Eritrocitos: 10 a 15 U/g Hb.
  - - - Tres subunidades
        
        Troponina 1: subunidad inhibitoria
        
        Troponina C: subunidad de unión a calcio.
        
        Troponina T: subunidad de unión a tropomiosina.
- - - - La velocidad de una reacción enzimática aumenta conforme la concentración de sustrato se incrementa.
        
        Tan pronto como una molécula de producto sale del sitio activo, entra otra en él. Se dice que la enzima está saturada a la velocidad máxima.
        Vmax
        
        Durante la fase inicial de la reacción, la velocidad es casi lineal con respecto a la concentración del sustrato [S]
        
        En la segunda fase (II) se alcanza una meseta y la reacción adquiere cinética de orden cero, es decir, la velocidad de reacción es independiente de [S]. En la fase II se alcanza la velocidad máxima y cualquier incremento adicional de sustrato ya no modifica la velocidad.
        
        Las enzimas no saturadas no pueden ejercer su actividad enzimática y por lo tanto es imposible medirlas.
        
        Para asegurar durante un análisis, que una reacción enzimática tenga cinética de orden cero, es necesario proporcionar la concentración óptima de sustrato para la reacción.
        
        La constante de Michaelis-Menten, que se conoce como valor Km es útil para determinar una [S] que no limite la velocidad de la reacción. (Km)
        
        Como la gráfica de Michaelis-Menten tiene forma de curva hiperbólica, el valor de Km se obtiene más fácilmente si la ecuación se transforma en ecuación de una línea recta. La ecuación de Lineweaver-Burk toma la forma recíproca de la ecuación de Michaelis-Menten para producir una ecuación de línea
        
        Km es una constante cuyo valor permanece sin ambio por cada par de enzima-sustrato dado.
  - - - Casi todas las enzimas de significado clínico tienen actividad óptima pH 6 – 8 (cercano al pH neutro), Para evitar que el pH varíe en forma considerable durante la reacción enzimática, se incorporan soluciones amortiguadoras a la mezcla de reacción al determinar la actividad enzimática.
  - - - Cada incremento de 1 °C de temperatura da un aumento del 10 % de la actividad enzimática.
        
        La mayoría de los análisis por enzimas con significado diagnóstico se efectúan a temperaturas de 25, 30 y 37 °C.
        
        Muchas muestras de suero se refrigeran o congelan para analizarlas posteriormente sin pérdida de su actividad enzimática. Para ello, es necesario verificar las características de conservación y almacenamiento.
  - - - Las coenzimas como el NAD+ y NADP+ actúan como aceptadores de electrones o donantes en reacciones de deshidrogenasa y funcionan como un segundo sustrat
  - - - Inhibición competitiva.
        
        La inhibición competitiva se invierte incrementando la concentración de sustrato. A medida que hay más sustrato disponible la posibilidad de que se enlace con el sitio activo de la enzima aumenta y no con el inhibidor.
        
        La Vmáx no se altera pero el valor aparente de Km se incrementa
      - Inhibición no competitiva.
        
        Sucede cuando una sustancia se une a la enzima en un sitio distinto al sitio activo, provocando un cambio en la configuración en la estructura enzimática alterando el sitio activo que deja de ser receptivo al sustrato.
        
        Reversible: cuando el inhibidor se enlaza a la enzima por uniones débiles.
        
        Irreversible: cuando la unión es covalente.
- - - - La pendiente de la porción lineal de la curva se utiliza para determinar la actividad enzimática. Las desviaciones en la linealidad que se detecta por cualquier método analítico en general se deben a que la actividad enzimática es muy alta
        
        En este caso se hace una dilución del suero, se vuelve a correr el análisis y el resultado final se multiplica por el factor de dilución.
  - - - El segundo paso: excepto la última reacción, se denomina reacción auxiliar e incorpora productos de la reacción precedente para que se verifique toda la secuencia hasta la reacción final. Las reacciones apareadas pueden tener más de una reacción auxiliar.
      - El tercer paso: es la reacción indicadora, es el producto de la reacción cuya absorbancia se mide en el análisis final
      - El primer paso: es la secuencia de la reacción primaria, porque es catalizada por la enzima cuya actividad se va a determinar.
- - - - Presentes en cantidades mínimas y son objeto de saturación.
        
        En ausencia de enzimas las reacciones químicas se efectuarían con tal lentitud que no podrían aportar la energía que se requiere para cubrir las necesidades metabólicas del organismo.
        
        Tienen implicaciones importantes como determinantes de la salud y la enfermedad.
- - - - Concentración del sustrato, concentración de la enzima, temperatura, pH, activadores e inhibidores.
        
        Cofactores que afectan
        
        Iones metálicos.
        Zn2+, Fe+2, Cu+2, Mg+2 y Mn+2.
        
        Compuestos orgánicos.
        
        Se denominan coenzimas. NAD+ (dinucleótido de de nicotinamida y adenina), NADP+ (dinucleótido de de nicotinamida y adenina fosfato) y piridoxal-5-fosfato.
        
        Las coenzimas enlazadas se denominan grupo prostético.
        La enzima intacta con su cofactor unido se denomina apoenzima.
        La enzima y el cofactor o coenzima forman la unidad con actividad catalítica que se denomina haloenzima.
        
        Compuestos inorgánicos.
      - En las células las enzimas se acoplan para formar parte de rutas bioquímicas como el ciclo de Krebs, el ciclo de la urea, etc.
- - - - Catalizan la rotura hidrolítica de compuestos
        
        LPS
        CHS
        ALP
        ACP
        5’-NT
        AMS
        LAP
        
        Acilhidrolasa de triacilglicerol (lipasa)
        Colinesterasa
        Fosfatasa Alcalina
        Fosfatasa Ácida
        5’-nucleotidasa
        Alfa-amilasa
        Leucinaminopeptidasa
    - - Catalizan la transferencia de un grupo distinto al hidrógeno de una molécula a otra
        
        GGT
        AST
        ALT
        CK
        
        Transferasa de gammaglutamilo
        Aminotransferasa aspártica (transaminasa)
        Alaninaminotransferasa (transaminasa)
        Creatincinasa
    - - Catalizan la eliminación de grupos de sustratos sin hidrólisis, dejando un enlace doble en el producto
        
        LAS
        
        Aldolasa de fructosa difosfato
    - - Catalizan la reacción de óxido reducción entre dos sustratos
        
        LD
        HBD
        G-6-PD
        
        Deshidrogenasa láctica
        Deshidrogenasa de 3-hidroxibutirato
        Deshidrogenasa de glucosa-6-fosfato
    - - Catalizan la interconexión de isómeros.
        
        PHI
        
        Isomerasa de fosfohexosa
    - - Catalizan la unión de dos moléculas que se aparean y la hidrólisis de un enlace pirofosfato en el ATP o algún componente similar
        
        Sintasa de carbamoil-fosfato
        Carboxilasa de acetil-CoA
- - - - Las enzimas se unen a las moléculas del sustrato que va a reaccionar y forman complejos enzima-sustrato (ES).
        
        El complejo ES coloca las moléculas de sustrato en la alineación correcta con la enzima, de manera que ésta pueda ejercer su actividad catalítica para formar el producto. Una vez que se lleva a cabo la catálisis, la enzima permanece sin cambio y queda en libertad para catalizar otras reacciones.
        
        Cada enzima cataliza sólo determinadas reacciones. La mayoría de las enzimas presenta especificidad absoluta, catalizan sólo una reacción específica con un sustrato específico. Otras muestran especificidad de grupo y un número más amplio de sustratos con grupos estructurados similares reacciona con ellas.
        
        Las específicas para determinado enlace, son enzimas que actúan en ciertos lípidos de enlace, como los enlaces péptidos de las proteínas o los enlaces glucosúricos de los carbohidratos
        
        Enzimas estereospecíficas sólo reaccionan con ciertos isómeros D y L de la glucosa.
        
        Mecanismo del enlace enzima-sustrato:
        
        Modelo de adaptación inducida
        
        Cuando el sustrato se enlace con el sitio activo induce a la enzima a modificar su forma levemente, de manera que se adapta en torno al sustrato.
        
        Formación leve de un enlace covalente entre el sustrato y el sitio activo.
        
        Sin importar el mecanismo de actividad catalítica, la forma en que la enzima distorsiona el sustrato reduce la energía de activación necesaria para acelerar la transformación S ---> P
- - - - En los métodos más actuales se emplean propiedades ópticas ultravioleta (340 nm) de las coenzimas que se van alterando durante la reacción enzimática, obteniendo una curva de progreso con tres fases características:
        
        2da Fase de Velocidad inicial.
        Después de la fase de retraso se inicia la fase de velocidad inicial de la reacción. Aquí la velocidad de reacción la formación de producto es constante y la concentración del producto aumenta en forma lineal con respecto al tiempo. La reacción enzimática tiene cinética de orden cero y en esta fase se debe determinar la actividad enzimática.
        
        3a Fase de Velocidad reducida.
        Consecutivamente, la velocidad de reacción se reduce a medida que la reacción adquiere cinética de orden cero
        
        Efectos de la inhibición del producto e inactivación de la enzima a medida que la solución amortiguadora se hace insuficiente para controlar el pH.
        
        Disminución de la concentración de sustrato, al alcanzar el equilibrio.
        
        1a Fase de retraso.
        Inmediatamente al añadir el suero con enzimas a una mezcla de reacción, se produce un período de equilibrio durante el cual las enzimas y los reactivos se unen entre sí
- - - - Las enzimas se proporcionan en exceso para que la reacción se efectúe en su totalidad.
        En la mayoría de los métodos actuales de análisis enzimático se utilizan las características de absorbancia de la coenzima NAD+.
- - - - SI propuso el katal (kat). Un katal es la cantidad catalítica de enzima que cataliza una reacción con velocidad de un mol por segundo (mol/s).