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Determinazione microrganismi alimenti (PCR ed identificazione tassonomica,…
Determinazione microrganismi alimenti
Metodi coltura dipendenti
Bassa sensibiltà e alto tempo di rilevamento
Metodi immunologici
Aumento sensibilità e basso tempo di rilevamento
Aumento sensibilità tramite arricchimento culturale
Separazione patogeno dall'alimento con metodi colturali o immunologici
Metodi di separazione e concentrazione
Metodi di filtrazione
Concentrazione non selettiva
Metodi di centrifugazione
Simple high-speed
Differential centrifugation
Lavora in base ad un incremento nella velocità di centrifugazione
Concentrazione non selettiva
IMS
Possiede concentrazione selettiva
Metodi basati su DNA
PCR
Amplificazione acidi nucleici
Ibridizzazione acidi nucleici usando sonde
Inibitori PCR
Nel cibo
Glicogeno, grassi, carboidrati, enzimi
Durante preparazione campione
Possono causare possibili falsi positivi o falsi negativi
Elettroforesi
Separazione di molecole cariche
Velocità di migrazione dipendente da dimensione DNA, conformazione DNA..
PCR ed identificazione tassonomica
1 coppia di primer
Più coppie
Multiplex PCR
Identifica Vibrio
Intossicazione alimentari
Strategia sperimentale
Verifica dell efficienza di amplificazione della singola coppia con il ceppo di riferimento
Verifica specificità
Verifica selettività
PCR Quantitativa
Step di una classica PCR
Più l'aggiunta di fluorescenza dipendente dalla quantità di amplificato
Precisione, sensibilità e velocità
Problematiche
Incapacità di distinguere tra cellule vitali e non
Soluzioni
EMA, PMA
Prevenzione amplificazione DNA