Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
tecnologie del DNA ricombinante (DNA proveniente da almeno 2 diverse fonti)
tecnologie del DNA ricombinante
(DNA proveniente da almeno 2 diverse fonti)
enzimi di restizione
(es ECOR1)
tagliano il DNA originando estremità coesive (raramente piatte)
Elettroforesi su gel
si separano i frammenti di DNA in base al PM e alla carica
nell'anemia falciforme mancano delle sequenze riconosciute da HPA1->frammenti + grossi e in > numero
ligasi
per saldare i frammenti di DNA
clonazione
del DNA, batteri usati come bio-operai)
tramite
plasmidi
necessari
vettori
di clonaggio, facilmente riconoscibili
geni per la
resistenza agli antibiotici
o per
proteine fluorescenti
per selezionare i batteri trasformati (col plasmide)
DNA da moltiplicare all'interno di
operone lac
(si aggiunge lattosio) così da selezionare batteri con plasmide e DNA estraneo
vettori eucariotici
son fagi (si può sostituire tutto il DNA), cromosomi artificiali batterici e cosmidi
nel
cromosoma
batterico
mediante trasposomi
moltiplicazione dei batteri trasformati, associando il gene ad un promotore forte
Genoteche o librerie genomiche
collezioni di frammenti (o cloni)di tutto il DNA clonato di un organismo
Cloni marcati con P32 per riconoscimento
a volte costruito con c-DNA (preferibile)
trascrittoma: DNA che si esprime in un tessuto al tempo x
PCR
per moltiplicare DNA
necessari 2 primer con gruppo OH libero ad estremità 3'; temp tra 72 e 90°C
Fingerprinting
, mediante riconoscimento sequenze STR, seguono genetica mendeliana
Sequenziamento:
per stabilire ordine esatto nucleotidi
Metodo Sanger
: allungamento DNA con 4 ddNTP, ognuno marcato con colorante diverso
A. Si denatura il DNA
B. Il primer si lega
C. La DNA Polimerasi inizia a copiare
D. Ogni volta che lega un ddNTP al posto di un normale dNTP la sintesi si arresta
E. Si ottengono frammenti di varia lunghezza che possono terminare con ddGTP, ddATP, ddCTP, ddTTP (riconoscibili dal colore)
F. Si separano i singoli frammenti con elettroforesi, in modo da dividerli dal più piccolo (sequenze iniziali) al più grande (sequenze terminali).
Uso Biotecnologie
redbiotech
(medicina e farmacia
inserire geni in
animali
(topi) per produrre proteine ricombinanti
le proteine vengono poi introdotte nell'individuo
inserire i geni in
cellule staminali
•
Totipotenti
: ->intero organismo (presenti solo nelle prime divisioni embrionali)
•
Pluripotenti
:->possono differenziarsi in tutti i tessuti
•
Multipoten
ti:->in pochi, specifici tessuti, in risposta a specifici segnali (ormoni o fattori di crescita)
•
Totipotenti
:->un solo tipo di cellula
clonazione di organi
e trapianti senza rigetto
clonazione di individui
(Dolly)
Witebiotech
industria e ambiente
biorisanamento
di metali pesanti e rifiuti
biocombustibili
biodiesel
da oli vegetali (soia e colza)
bioetanolo
da carboidrati (cereali)
greenbiotech
in agricoltura
OGM di I generazione
= piante resistenti ai parassiti
OGM di II generazione
=piante con aggiunta di sostanze nutritive (Golden rice)
OGM di III generazione
= piante che producono medicinali e biocombustibili