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Stratégie et méthodes d'identification des mutations délétères à l'…
Stratégie et méthodes d'identification des mutations délétères à l'origine des maladies mendéliennes
Mutation Connue
Séquençage Méthode Sanger
Séquençage Nouvelle Génération
Criblage
dHPLC
HRM
détecte les polymorphismes ou les mutations quand ceux-ci ne sont pas prédominants
repose d'abord sur une amplifatin par PCR puis la formation d'hétéro/d'homoduplexe
Mutation Inconnue
Séquençage par la méthode Sanger (1 mutation à caractériser
)
AFLP
OSA
(oligonucléotides spécifiques d'allèles)
DOT BLOT
amplification des séquences encadrant la mutation par PCR
OSA marqués
REVERSE DOT BLOT
Amplification des séquences encadrant la mutation par PCR et marquage par la biotine
PCR marqués
Discrimination allélique par
PCR en temps réel
la sonde se fixe : elle est dégradée par la polymérase et le fluorophore est libéré du quencher => fluorescence
la sonde ne se fixe pas : le fluorophore est associé au quencher