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ANTICORPI (ISOTIPI (CLASSI) di Ig differenze catena pesante regioni…

ANTICORPI (ISOTIPI (CLASSI) di Ig
differenze catena pesante regioni costanti
IgM e IgA hanno catena J joining 15 kDa
legata sequenza di coda da ponti disolfuro

stabilizza multimero
trasporto basolaterale a luminale

, i MECCANISMI che danno VARIABILITA' sono 3, TCR T Cell Receptor
catena beta (simile catena pesante) su cromosoma 7
catena alfa su cromosoma 14
5% ha catena gamma-delta
delta è in un locus interno alla catena alfa--> persa se ricombinazione locus alfa
gamma è sul cromosoma 7
ricombinazione circoletti: T-RECs T-cell receptor Excision Circles
reverse PCR
discriminare linfocita T naive (contiene ancora circoletti) e linfociti T memoria
CDR3 lega peptide immunogenico
CDR1 e CDR2 legano MHC , siero componente non corpuscolata del sangue privata dei fattori di coagulazione
funzioni effettrici anticorpi C-terminus
primaria: legare antigene
secondarie:

ADCC (citotossicità cellulare anticorpo dipendente)
opsonizzazione
complemento
attivazione mastociti

proteine globulari
verifica risposta anticorpale
prelievo sangue
immunoelettroforesi--> assorbanza
policlonali. aumento a base larga
monoclonali: picco stretto (gammopatia monoclonale premaligno 80% picco gamma, ma anche beta e alfa2), DIMOSTRAZIONE DEL RIARRANGIAMENTO DEL DNA DI CATENE k DURANTE LO SVILUPPO DEL LINFOCITA B 1976
Tonegawa e Hozumi Nobel 1987
cell embrionali di topo che non producono anticorpi
MOPC321: mieloma che produce catena k
enzimi restrizione
southern blot
elettroforesi:
embrione--> 2 bande
MOPC321-->1 banda (1 sito di restrizione della linea germinale perso), RICOMBINAZIONE SOMATICA - V(D)J
recettori per antigene
segmenti genici su cr diversi nella linea germinativa, 5' L V (D) J C 3'
L leader 20-30 residui N-term guida proteine da ribosomi a RE
segmenti J lunghi 30-50 kpb
catena pesante cromosoma 14 1.250 kpb

ricombinazione D-J
ricombinazione V-DJ
splicing VDJ-C
45LV, 23D, 6J, 9C

catene leggere

ricombinazione D-J
splicing V-DJ
K cromosoma 2 35LV, 5J, 1C
lambda cromosoma 22 30LV, 4JC

, SCAMBIO DI CLASSE-SWITCH ISOTIPICO
solo linfociti B
introni: non altera frame di lettura

trascritti germinativi non messaggeri ma aprono DNA (AID ha bisogno di dna denaturato)
- AID riconosce anse R
- AID deammina c ad U
- UNG crea sito AP
- endonucleasi crea nick
- DSB

differenza: eliminazione base zone ricche di guanina e citosina con motivi conservati prima regioni costanti , linfociti B maturi esprimono sia IgM e IgD splicing alternativo trascritto primario. siti di splicing=siti di poliadeniazione del pre-mRNA, Calcolo reperorio Ig
10alla6
prodotto segmenti delle regioni e
prodotto appaiamento catena pesante e leggera

diversità giunzionale
potenziale: anticorpi 10alla13 e linfociti T 10alla18

, ANTICORPI MONOCLONALI Koehler e Milstein 1975

cell spleniche+linea mutante mieloma ko HGPRT
(ipoxantina guanina fosforibosiltrasferasi)
fusione PEG (poliglicol etilenico, facilita fusione membrane con formazione ibridomi)
terreno HAT (ipoxantina aminopterina timidina)
- aminopterina impedisce formazione tetraidrofolato --> richiesto per sintesi ex-novo purine
  - mieloma ko HGPRT--> no via di salvataggio
    --> blocco formazione TMP da dUMP
selezione di ibridomi: contengono HGPRT e proliferano come mieloma
(splenociti crescono MA no immortali)

, immunocomplessi

zone con eccesso di anticorpi--> immunocomplessi piccoli
equivalenza--> immunocomplessi grandi
eccesso antigeni--> complessi piccoli

Legame Ag-Ab
forze repulsive sovrapposizione nuvole elettroniche
Frep=x/dalla12
forze attrattive
legami elettrostatici=1/dalla2
van der Waals =1/dalla7
avidità dipende da affinità&valenza
, anticorpi di membrana recettore per antigene dei linfociti B

inserire membrana: aa idrofobici
ancoraggio: coda intracitoplasmatica non idrofobica

secereti solubili cambia parte Fc eliminata regione idrofobica e coda intracitoplasmatica
macromolecole stimolano linfociti attivando risposte anticorpali perchè crosslinking recettori
apteni dinitrofenolo, no immunogeno
complesso aptene+carrier è immunogeno)