Please enable JavaScript.

Coggle requires JavaScript to display documents.

Geeeeeeeeenitekniikka (Erotusmenetelmät (Elektroforeesi (Hybridisaatio…

- - - - Blotit
        
        DNA - Southern
        
        RNA - Northern
        
        Prot - Western
      - Radioleiman tarttuu tikkaaseen, jossa on vastinjakso
      - Tarttunut leima nähtävissä rtg-filmiä valotettaessa
    - - Emäsparistandardi vertailukohtana
  - - - Tasokromatografia
        
        Ohutlevykromatografia
        
        Paperikromatografia
      - Pylväskromatografia
        
        Ioninvaihto
        
        Affiniteetti
        
        Geelisuodatus
- - - - Antibioottiresistenssi - plasmidissa
        
        Antibioottivalinta
        
        Ampisilliini-malja
      - LactZ - värjäys
        
        Värjäytymisvalinta
        
        betagalaktosidaasin aminopää
        
        karboksyylipää bakteerilla
        
        Jos kumpikin, X-Gal hajoaa vapauttaen sinistä
        
        X-Gal ja IPTG -malja
    - - Entsyymit
      - Proteiinit
      - Rokotteet (pinta-antigeenit)
        
        Aiheuttaa immunisaation
      - Proteiinituotanto - bakteereissa tai hiivoissa
    - - Digestio #
      - Ligaatio
      - Transformaatio
      - Selektio
      - Kasvatus
  - - - Vain yksi aluke
      - ddNTP - fluoresoivasti leimattuja 4 väriä RGB+Y(B)
      - Sangerin dideoksimenetelmä
      - polyakryyliamidigeelissä elektroforeesi
      - laser virittää fluorileimat, detektori nauhoittaa välähdysten värin
    - - Polymeraasi
        
        Optimilämpötila +72°C
      - 2 Primeeriä / Aluketta
      - Puskuriliuos
      - Templaatti / Malli
      - MgCl2 - suolaa polymeraasille
      - Nukleotidit / dNTP
    - - Suunnittelua
      - Laitteet / hauteet
      - Tieto emäsjärjestestyksestä, templaatti ja alukkeet
    - - Initialization 94-98°C 1-10 min (+95°C)
      - Denaturation 94-98°C 20-30 sec (+95°C)
      - Annealing
        
        aluke tarttuu 3' päähän kopioitavaa sarjaa
        
        50-65°C 20-40 sec (+55°C)
      - Extension 75-50°C 1000bp/min (+72°C)
      - Toistetaan väh. 20 krt (25-35)
      - Lopetusextensio +72°C 5 min
      - Jäädytys / ensivarastointi 4°C
- - - - Genominen - kromosomaalinen
      - cDNA-kirjasto - intronit silmukoitu pois
        
        ilmennetyt geenit
        
        Käänteiskopioijaentsyymillä mRNA -> cDNA
        
        cDNA tarpeen, koska bakteereissa ei introneja pilkkovaa entsyymiä
      - Säilötty kompetenttien bakteerien solulimaan
      - Lajin koko perimä ylläpidettävissä/kasvatettavissa bakteerimaljalla
    - - Hajoitus
        
        Jauhaminen
        
        Detergentit
        
        fenoli-kloroformi-isoamyylialkoholi
        
        SDS
        
        Proteaasit
        
        proteinaasi K
        
        Nukleaasien inaktivointi
      - Puhdistus
        
        Uuttaminen
        
        Saostaminen
        
        etanoli
        
        isopropanoli
        
        Elektroforeesi
        
        Suodattaminen
        
        Sentrifugointi
        
        Dialyysi
        
        Kromatografia #
  - - - RNAasi-inhibiittorit
        
        DEPC - dietyylipyrokarbonaatti
        
        guanidiini-isotiosyanaatti
- - - - Restriktioentsyymillä katkaistaan
        
        RekombinanttiDNA = yhdistelmäDNA
        
        tunnistussekvenssi
        
        hyvin lämpöherkkiä! -20°C ja jäissä käytettäessä
      - Kopioituvat itsekseen
        
        kaksijuosteinen DNA
        
        Jopa 700 kpl / solu!
        
        copy number
      - Bakteereissa ja sienissä (hiivoissa)
    - - Adeno
      - Retrovirukset
        
        Lentivirukset